هر ساله پهنه وسیعی از حاصلخیزترین مناطق تولیدی کشور ما و قسمت عمده محصولات اقتصادی مهم کشور، در معرض تنش سرما قرار می گیرند. باکتری های دارای ژن فعال هسته یخ به عنوان یکی از مهمترین عوامل بیولوژیکی تشکیل هسته یخ در گیاهان، نقش عمده ای در تسریع سرمازدگی در دماهای بالاتر زیر صفر درجه دارند، لذا درطی فصول پاییز و زمستان سال های 89 تا 91 به منظور شناسایی باکتری های دارای ژن هسته یخ نمونه های گیاه پروانش دارای علائم سرمازدگی از شهرستان های بابل، بابلسر، ساری، قائمشهر و آمل استان مازندران جمع آوری گردید. از کشت نمونه های دارای علائم سرمازدگی، جدایه هایی با کلنی های محدب، زرد رنگ و لعاب دار روی محیط آگار غذایی حاوی سوکروز بدست آمد. به کمک واکنش های فیزیولوژیکی و بیوشیمیایی، باکتری های جدا شده، شناسایی گردیدند. عمده جدایه های بدست آمده متعلق به جنس xanthomonas بودند. جدایه های بدست آمده از پروانش و جدایه های xanthomonas موجود در کلکسیون آزمایشگاه که از پسته، سلوی، پامچال، توسکا و ازمک جداسازی شده و از نظر فعالیت هسته یخی بررسی نشده بودند، مورد ارزیابی فنوتیپی هسته یخ با آزمون انجماد قطره ای قرار گرفتند. جدایه های جدا شده از پروانش بیشترین فعالیت فنوتیپی هسته یخ را از خود نشان دادند، لذا به منظور ردیابی ژن هسته یخ (ina) به کمک آغازگر طراحی شده، واکنش زنجیره ای پلی مراز انجام گرفت. تعدادی از جدایه ها که از نظر فنوتیپی فعال بودند بخش ژنومی مورد نظر را تکثیر کردند. این جدایه های فعال هسته یخ به کمک اتیل متان سولفونات(ems) و tn5 تحت فرآیند موتاسیون زایی قرار گرفتند. سپس جدایه های جهش یافته فاقد هسته یخ به کمک آزمون انجماد قطره ای گزینش گردیده و به منظور ردیابی ژن هسته یخ به همراه والد مادری به عنوان شاهد وارد چرخه pcr شدند. جدایه هایی که با غیر فعال شدن ژن ina فنوتیپ جهش یافته را نشان دادند، روی گیاه لوبیا مورد ارزیابی قرار گرفتند و جدایه های جهش یافته گزینش نهایی شدند.