نام پژوهشگر: فاطمه زاهدنمازی

بررسی آنتی بادی های ضد h. pylori تولید شده در حیوان آژمایشگاهی برای اهداف کاربردی
پایان نامه وزارت علوم، تحقیقات و فناوری - دانشگاه الزهراء - دانشکده علوم پایه 1392
  فاطمه زاهدنمازی   طاهره فلسفی ممقانی

چکیده بیش از نیمی از جمعیت جهان آلوده به h. pylori می باشند. طیف عوارض بالینی بیماری وسیع بوده و شامل التهاب معده مزمن، زخم معده و زخم دوازدهه و آدنوکارسینومای معده و لنفومای مرتبط با malt می باشد. عفونت h. pylori در بدن میزبان منجر به ایجاد پاسخ ایمنی خصوصاً پاسخ ایمنی هومورال در خون محیطی و تولید آنتی بادی ضد آنتی ژن های h. pylori می شود . عفونت h. pylori به وسیله روش های تشخیصی متنوعی که شامل روش های تهاجمی و غیر تهاجمی می باشد، شناسایی می شود. روش های غیرتهاجمی بر روش های تهاجمی از آن جهت که نیاز به انجام آندوسکپی و برداشتن بیوپسی ندارند، ارجحیت دارند. روش elisa و immunoblotting معمول ترین روش های غیرتهاجمی مبنی بر جستجوی آنتی بادی می باشند. هدف از پژوهش حاضر بررسی آنتی بادی های تولید شده بر ضد آنتی ژن های بارز موجود در غشای خارجی باکتری h. pylori و تعیین آنتی ژن های ایمونودامینانت و آنتی بادی های غالب موجود در سرم حیوان ایمونیزه می باشد. با استفاده از این آنتی بادی ها می توان آنتی ژن های اختصاصی این ارگانیسم را در نمونه های بیماران ردیابی و وجود عفونت h. pylori را تشخیص داد. .به این منظور ابتدا آنتی ژن های غشای خارجی h. pylori غیر محلول در سارکوزیل تخلیص شده و به خرگوش ماده سفید تزریق شد و سرم خرگوش ایمن شده پس از سه تزریق جداسازی و بررسی شد. به منظور تخلیص آنتی بادی اختصاصی ضد h. pylori سرم تحت کروماتوگرافی تمایلی قرار گرفت. سپس تیتر آنتی سرم به دست آمده توسط روش elisa به دست آمد و آنتی بادی monospecific تیتر شده با آنتی ژن های حاصل از سویه های مختلف با روش elisa و western blot مورد بررسی قرار گرفت. برای بررسی کاربردی این آنتی بادی ها با استفاده از روش تشخیصی capture elisa مدفوع بیماران مورد ارزیابی قرار گرفت. پاسخ ایمنی بالایی در مقابل چهار آنتی ژن پروتئینی غشای خارجی با وزن های 21 ، 25 ، 26, 34 کیلودالتونی مشترک در میان سویه های مختلف h. pyolri مشاهده شد. تیتر سرم قبل و بعد از خالص سازی با کروماتوگرافی به ترتیب 1/2000 و 1/1000 بود .پس از کروماتوگرافی هیچ واکنش با e. coli و s. aureusبه عنوان شاهد منفی مشاهده نشد. کاهش تیتر سرم بعد از کروماتوگرافی نسبت به تیتر سرم قبل از کروماتوگرافی نشان دهنده حذف آنتی بادی های واکنش دهنده با e. coli و s. aureus از سرم بود. از آنجایی که حضور آنتی بادی های مزبور نتایج مثبت کاذب را در روش elisa افزایش می دهند، حذف آنها به کاهش میزان مثبت کاذب انجامیده و میزان اختصاصیت تست را بالا می برد. آنتی بادی های به دست آمده در این پژوهش، شناساگر های خوبی برای h. pylori می باشند. کلید واژه: h. pylori ، الایزا ، ایمونوبلاتینگ ، کروماتوگرافی تمایلی