نام پژوهشگر: ریحانه شمس خوزانی

مطالعه اثر ترکیبات سیستئامین و 2-مرکاپتواتانول بر بیان پروتئین نوترکیب single chain variable fragment (scfv) آنتی بادی ،بر علیه آنتی ژن cd22 در مخمر pichia pastoris
پایان نامه دانشگاه آزاد اسلامی - دانشگاه آزاد اسلامی واحد علوم دارویی - دانشکده زیست شناسی 1392
  ریحانه شمس خوزانی   وحید خلج

مقدمه: scfv یکی از معروفترین قطعات حاصل از آنتی بادیهای تک دودمانی است و مخمر pichia pastoris یکی از مهمترین میزبان های بیانی اینگونه قطعات محسوب می شود. روش های بسیاری برای افزایش میزان بیان پروتئین های هترولوگ در این میزبان وجود دارد .باتوجه به اینکه فرایند تغییرات پس از ترجمه ای در شبکه آندوپلاسمی مرحله تعیین کننده سرعت در تولید پروتئین هاست، هدف قرار دادن چاپرون هایی نظیر pdi (protein disulfide isomerase)یکی از مهمترین استراتژی های افزایش بیان محسوب می شود. در این مطالعه اثر ترکیبات القا کننده بیان pdi نظیر سیستئامین و2-مرکاپتواتانول در افزایش میزان بیان، مورد ارزیابی قرار می گیرد . هدف: بررسی اثر سیستئامین و 2-مرکاپتواتانول بر میزان بیان پروتئین نوترکیب scfv روشها: سویه مورد نظر در برابرعوامل احیا کننده با غلظت های مختلف و فواصل زمانی مختلف رشد داده شد.میزان بیان با روش sds-page و وسترن بلاتینگ و الایزا ودیگر روش های مولکولی بررسی شد. نتایج:mic (minimum inhibitory consentration) برای ترکیبات سیستئامین و2-مرکاپتواتانول تعیین شد نتایج mic نشان داد که ازغلظت 6.25 میلی مولار برای سیستئامین و غلظت 1.5میلی مولار برای 2-مرکاپتواتانول برای بهینه کردن شرایط کشت می توان استفاده کرد و سویه های ترانسفورم شده با سازه بیان کننده scfv در حضور غلظت های مناسب از این دو ترکیب رشد داده شد. میزان بیان در حضور سیستئامین افزایش معنی داری نشان داد اما 2-مرکاپتواتانول منجر به کاهش میزان بیان گردید. نتیجهگیری: در این تحقیق سیستئامین در غلظتهای sublethal توانست میزان بیان scfvعلیه آنتی ژن cd22را افزایش دهد. به نظر می رسد این اثر افزایشی ناشی از القا بیان چپرونها ئی نظیر pdi باشد. این در حالیست که -me 2چنین افزایشی را موجب نگردید.