نام پژوهشگر: رسول رضائی

تشخیص و ردیابی ژن‏های موثر در بیماری‏زایی جدایه‏ های pseudomonas syringae pv. syringae از میزبان‏های مختلف
پایان نامه وزارت علوم، تحقیقات و فناوری - دانشگاه شیراز - دانشکده کشاورزی 1392
  رسول رضائی   سید محسن تقوی

طی فصول مختلف سال‏های 1391-1389، از گیاهان مختلفی نظیر هسته‏داران، دانه‏داران و غلات در استان‏های کهگیلویه و بویراحمد، کردستان، فارس و چهارمهال و بختیاری سی سویه pseudomonas syringae pv. syringae جداسازی گردید. شش سویه برای مطالعات بعدی مورد استفاده قرار گرفتند. برای بررسی نوسانات جمعیتی سویه‏های مختلف pss، هر سویه به تمام گیاهان مورد مطالعه مایه‏زنی شد. در برگ‏های هلو سویه‏های s18،a10 و p5 به خوبی رشد کردند و در برگ‏های گیلاس بیشترین رشد مربوط به جدایه‏های گیلاس و هلو بود. همچنین در برگ‏های زردآلو سویه‏های a10، s18 و p5 به خوبی رشد کردند. در نهال گلابی تنها جدایه‏ای که به خوبی رشد کرد جدایه گلابی بود. در آزمون بیماری‏زایی و بررسی پرآزاری، شش جدایه pss از میزبان‏های مختلف مورد استفاده قرار گرفت. تمام جدایه‏ها با شدت‏های متفاوت توانایی ایجاد علائم بیماری را در نهال‏های هلو داشتند. در ساقه زردآلو سه سویه a10 ، p5 و s18 علائم نکروز پیشرفته را ایجاد کردند. تنها سویه‏ای که توانست علائم بیماری را در برگ‏های گلابی ایجاد نماید سویه p8 بود. در برگ‏های گندم علائم شدید به صورت لکه‏های آب‏سوخته و توسط سویه‏ w3 ایجاد گردید. مهم‏ترین ژن‏های بیماری‏زایی با استفاده از آغازگرهای اختصاصی در جدایه‏های مختلف ردیابی شد. ژن مسئول تولید زهرابه سیرینگومایسین (syrb) در تمام سویه‏های pss مورد مطالعه و ژن مسئول ترشح زهرابه سیرینگومایسین (syrd) در جدایه‏های p5، s18، w3 و a10 ردیابی شد. ژن sypa مسئول تولید زهرابه سیرینگوپپتین، در جدایه‏های p5، s18، p8 و a20 و ژن sypb در جدایه‏های p5، s18، w3 و a10 ردیابی گردید. در جدایه‏های p5 و s18 ژن nit مسئول تولید آنزیم نیتریلاز، ردیابی و ژن تولید کننده سیدروفور اکروموباکتین (ach) فقط در سویه p5 ردیابی گردید. سویه w3 در آزمون تشخیصی pcr با استفاده از جفت آغازگر اختصاصی hrma1 و hrma2، یک قطعه dna با اندازه تقریبی 1128 جفت باز را تولید کرد. قطعه‏های تکثیر شده با آغازگرهای اختصاصیb1، b2 (ژن syrb) و d2 ,d1 (ژن syrd) به ترتیب با اندازه های750 و 446 جفت باز تعیین ترادف شدند. قطعات تعیین ترادف شده با قطعات مورد نظر در جدایه‏های مختلف pss موجود در بانک ژن شباهت داشتند. میزان بیان ژن pad3 که در تولید فیتوالکسین کامالکسین در گیاه آرابیدوپسیس نقش دارد، بر اساس واکنش real time pcr مورد بررسی قرار گرفت. الگوی بیان گیاه آرابیدوپسیس نشان داد که گیاه در برابر سویه‏های مختلف pss مقادیر متفاوتی از ژن‏های دفاعی را فعال می‏کند.