نام پژوهشگر: فاطمه زبردست رودی

تولید پروتئین نوترکیب آمیلوپلولاناز coh01133 از باکتری کوهنلا
پایان نامه وزارت علوم، تحقیقات و فناوری - دانشگاه پیام نور - دانشگاه پیام نور استان البرز - دانشکده کشاورزی 1393
  فاطمه زبردست رودی   ناصر فرخی

با توجه به نیاز گسترده‎ی صنایع غذایی به انواع شیرین کننده‎های حاصل از هیدرولیز نشاسته همچون شربت‎های گلوکز، مالتوز و فروکتوز، استفاده از آنزیم‎های هیدرولیز کننده‎ی نشاسته اهمیت ویژه‎ای پیداکرده است. آنزیم آمیلوپلولاناز (ec 3.2.1.41) یکی از اعضای خانواده‎ی آلفاآمیلازهاست که، قادر به هیدرولیز پیوندهای α-(1→4) و α-(1→6) در نشاسته، پلولان و دکسترین می‎باشد.‎ dna ژنومی از باکتری کوهنلا استخراج شد. طراحی پرایمر از دو توالی از ژن‎های کد کننده‎ی آنزیم آمیلوپلولاناز در این باکتری با نام‎های coh00831 به طول bp 1998 و coh01133 به طول bp 3678 صورت گرفت. ژن coh00831 ابتدا در ناقل کلونینگ pgem-t همسانه‎سازی شد. سپس در ناقل بیانی pet28a کلون، و در میزبان بیانی bl21 (de3) با القاء (m 1/0) iptg در °c 22 به مدت 6 ساعت بیان گردید. ژن coh01133 نیز پس از هضم آنزیمی با آنزیم‎های مهندسی شده در دو سر ژن، در ناقل بیانی pet28a کلون و در میزبان بیانی bl21 (de3) با القاء (m 1/0) iptg در °c 25 به مدت 4 ساعت بیان شد. پس از خالص سازی و سنجش فعالیت آنزیم‎ها، مطالعات بیوانفورماتیکی به منظور بررسی خصوصیات بیوشیمیایی و شناسایی دمین‎های کاتالیتیکی و غیر کاتالیتیکی توالی‎ها نیز صورت گرفت.