نام پژوهشگر: غلامرضا شریفی سیرچی

جداسازی و شناسایی ملکولی باکتری لاکتوباسیلوس اسیدوفیلوس از نمونه های ماست شهرستان شهر بابک
پایان نامه وزارت علوم، تحقیقات و فناوری - دانشگاه شهید باهنر کرمان - دانشکده کشاورزی 1388
  معین ایزدی   محمد حسن فولادی

باکتری لاکتوباسیلوس اسیدوفیلوس یکی از مفیدترین گونه های لاکتوباسیلوس می باشد که به عنوان یک میکرواورگانیسم پروبیوتیک در محصولات لبنی مانند ماست، شیر و بخش هایی از دستگاه گوارش پستانداران نظیر روده انسان دیده می شود. این باکتری گرم مثبت و کاتالاز منفی بوده و بهترین رشد را در دمای °c37 به مدت 72 ساعت در شرایط میکروآئروفیل دارد. باکتری مزبور از جمله باکتری های هموفرمنتاتیو بوده و قادر به تخمیر قندهایی همانند گلوکز، فروکتوز، مانوز، گالاکتوز و غیره می باشد. در این تحقیق سویه های بومی لاکتوباسیلوس اسیدوفیلوس از 20 نمونه از ماست های منطقه شهر بابک کرمان جداسازی گردید. به منظور شناسایی این باکتری از روشهای غیر ملکولی شامل بررسی رشد در دماهای مختلف، بررسی حساسیت یا مقاومت به دیسک های آنتی بیوتیک و بررسی رفتارهای رشدی نسبت به تخمیر قندها، به همراه دو روش ملکولی تکثیر توالی جزئی ژن16s rrna و شناسایی به کمک روش pcr-rflp استفاده گردید. با استفاده از این آزمایشات 12 جدایه لاکتوباسیلوس اسیدوفیلوس خالص سازی گردید که نتایج بدست آمده از آنها با خصوصیات ذکر شده در کتاب باکتری شناسی سیستماتیک روشهای برگی و نمونه شاهد مثبت مطابقت داشت. این اولین گزارش کشوری از جداسازی جدایه های لاکتوباسیلوس اسیدوفیلوس از ماست های بومی شهر بابک کرمان می باشد.

القای مقاومت در نهالهای لایم در برابر بیماری شانکر آسیایی مرکبات
پایان نامه وزارت علوم، تحقیقات و فناوری - دانشگاه شهید باهنر کرمان - دانشکده کشاورزی 1388
  بنفشه بهشتی   غلامرضا شریفی سیرچی

استفاده از مواد القا کننده زیستی وغیر زیستی برای بهبود مقاومت میزبان نسبت به بیماریها، دستاوردی است که می تواند برای مدیریت بیماریهای گیاهی قابل پیگیری باشد.شانکر باکتریایی مرکبات یکی از مخرب ترین بیماریهای مرکبات تجاری است و خسارات ناشی از آن باعث ایجاد مشکلات اصلی اقتصادی این محصول می شود. به منظور بررسی ایجاد مقاومت القایی نسبت به بیماری شانکر باکتریایی مرکبات از دو روش پرایمینگ و post inoculation در گیاه لیموترش (لایم) استفاده گردید. این آزمایش در قالب طرح کاملا تصادفی با ده تکرار انجام شد. در این مطالعه از تیمارهای سالیسیلیک اسید، آسکوربیک اسید، چای سبز، بتا-آمینو بوتیریک اسید، سم اکسی کلرور مس، تیامین و آب مقطر استفاده شد. نتایج فنوتیپی نشان دادند که چای سبز و بتا-آمینو بوتیریک اسید بیشترین اثر را در کنترل بیماری داشتند. به منظور میزان بیان ژن بتا-1و3-گلوکاناز از واکنش real-time quantitative pcr استفاده گردید. نتایج حاصل از این واکنش نشان داد که بیان این ژن در نهال تیمار شده با baba نسبت به نهال تیمار شده با آب مقطر (شاهد) افزایش قابل توجهی داشت. بنابراین نتایج فنوتیپی و کمی نشان دادند که baba و چای سبز مقاومت القایی را در لایم ایجاد کردند.

تولید لاینهای ثانویه تریتی پایرم و استفاده از مارکرهای ژنومی و مولکولی در گزینش لاینهای مطلوب در نسلهای تفرق f2و f3 با روشهای مرسوم سیتولوژی و نوین سیتوژنتیک
پایان نامه وزارت علوم، تحقیقات و فناوری - دانشگاه شهید باهنر کرمان 1388
  زهره پورفریدونی   حسین شاهسوند حسنی

هیبریداسیون بین جنسی یکی از روشهای انتقال ژنومهای مفید به گونه های زراعی است. به منظور انتقال صفات مطلوب ژنوم d به لاینهای اولیه تریتی پایرم (aabbebeb2n=6x=42)، تعداد 167 تلاقی بین ارقام گندم نان ( aabbdd)2n=6x=420و لاینهای اولیه تریتی پایرم انجام و148 بذر دورگf1 ایجاد شد. ساختارکروموزومی 44 گیاه (291 سلول متافاز میتوزی) و 19گیاه (217سلول متافاز میوزی) از گیاهان جدید و ممکن تریتی پایرم ثانویه مقاوم به شوری (npssttips) با روشهای مرسوم سیتولوژی بررسی و نتایج به ترتیب نشان داد اولاً میزان آنیوپلوئیدی با افزایش نسلهای خودگشنی کاهش می یابد.ثانیاً وجود کروموزومهای منفرد در سلولهای متافازی میوز حاکی از عدم همولوژی کامل بین کروموزومهای ژنومهای d وeb است. وجود کروموزومهای گونه تینوپایرم بسارابیکوم(ebeb,2n=2x=140 در چهار گیاه (20 سلول متافاز میتوزی) و چهار گیاه (27 سلول متافاز میتوزی) از نسل سوم ژنوتیپهای جدید و ممکن تریتی پایرم ثانویه مقاوم به شوری به ترتیب حاصل از تلاقی رقم امید با لاین تریتی پایرم اولیه st/b و رقم گندم نان نوید با لاین تریتی پایرم اولیه (ka/b)(cr/b) با استفاده از روش هیبریداسیون dnaژنومی در محل (gish) با کاوشگر dna ژنومی گونه سودورجینریا استیپی فولیا(,9 ss,2n=2x=14) نشاندار شده به روش غیرمستقیم با بیوتینdutp-11 مطالعه و نتایج حاکی از وجود 6-1 کروموزوم از ژنوم ebدر آنها بود. نتایج حاصل از تکنیک هیبریداسیون در محل با کاوشگر ریبوزومی pta71 نشاندار شده با بیوتینdutp-11 روی سه گیاه (ده سلول میتوزی) لاین اولیه تریتی پایرم ka/b)(cr/b)) و سه گیاه (15 سلول میتوزی) از ژنوتیپ جدید و ممکن تریتی پایرم ثانویه مقاوم به شوری (npssttips) حاصل از تلاقی رقم گندم نان نوید با لاین تریتی پایرم اولیه (ka/b)(cr/b) وجود 8-6 محل دورگه رییوزومی نورانی در لاین تریتی پایرم اولیه و 8-5 محل دورگه نورانی کاوشگر ریبوزومی pta71 در گیاهان جدید و ممکن تریتی پایرم ثانویه مقاوم به شوری را نشان داد. بنابراین می توان از این نشانگر برای انتخاب گیاهان جدید و ممکن تریتی پایرم ثانویه مقاوم به شوری (npssttips ) حاوی 14 کروموزوم ژنوم a ، 14 کروموزوم ژنوم b، 12 کروموزوم ژنوم d و یک جفت کروموزوم eb5، در نسلهای تفرق f2 به بعد حاصل از تلاقی لاینهای اولیه تریتی پایرم و گندم نان استفاده نمود.

تولید نانوذرات طلا توسط اکتینومیست ها
پایان نامه وزارت علوم، تحقیقات و فناوری - دانشگاه شهید باهنر کرمان - دانشکده کشاورزی 1390
  سارا بیگلری   غلامرضا شریفی سیرچی

این اولین گزارش بکار گیری میکروارگانیزم های اکتینومیست در تولید نانو ذرات طلا از خاکهای منطقه بردسیر کرمان است. دراین پروژه ما توانستیم با روشی نسبتاً ساده و ارزان و با کمک میکروبهای جدا شده از خاکهای این منطقه، نانو ذرات طلا را تولید کنیم. روش معمول ایجاد نانو ذرات طلا استفاده از مواد شیمیایی اسیدی می باشد که از نظر محیط زیستی امن نیستند و شامل ناخالصی های سمی است. تولید نانو ذرات به روش مصنوعی بسیار هزینه بر و وقت گیر می باشد و همچنین در هنگام سنتز، ذرات بزرگتر نیز تولید می شود. لذا در این تحقیق تلاش می شود با استفاده از اکتینومیست ها، نانوذرات طلا باروشی بسیار ساده و کم هزینه تولید شود. این روش استحصال در مقایسه با روشهای کلاسیک، اقتصادی، آسان و علاوه بر دارا بودن راندمان بالاتر، از نظر استانداردهای زیست محیطی نیز مقبول تراست. استفاده از روشهای کلاسیک استخراج فلزات اغلب دارای مخاطرات زیست محیطی است. زیرا این روشها موجب آلودگی منابع آب، خاک و هوا میگردند و چه بسا ساختار طبیعی اکوسیستم مناطق وسیعی از پیرامون خود را تخریب می کنند اکتینومیست ها باکتریها گرم مثبت، هوازی، رشته ای و غیر متحرک هستند و بعضی از آنها قادرند یون های بعضی از فلزات سنگین را احیا کرده و آنها را به نانو ذرات فلزی آمورف و یا کریستالی تبدیل کنند. دراین پروژه قریب پنجاه ایزوله از اکتینومیست های خاکهای منطقه بردسیر کرمان جداسازی و بمنظور تولید نانو پارتیکل های طلا ارزیابی شدند. از بین آنها، شش ایزوله در درجه بندی مورد نظر، تولید نانو ذرات طلا نمودند. در مطالعات میکروسکوپ الکترونی شکل و پراکنش اندازه نانو ذرات طلای ایجاد شده و مورفولوژی ریسه ها و اسپورهای ایزوله های فعال تعیین گردید و مطالعات مولکولی تعیین توالی ایزوله های مذکور در جهت شناسایی این ایزوله ها انجام گردید. از اهداف آتی این تحقیق تعیین روش تولید نانوذرات و استخراج آن ها از توده های زیستی میکروارگانیسم ها می باشد

بررسی اثر موتاژن های فیزیکی و شیمیایی برخصوصیات مورفولوژیکی،مولکولی و بیوشیمیایی گل مارگریت
پایان نامه وزارت علوم، تحقیقات و فناوری - دانشگاه تحصیلات تکمیلی صنعتی کرمان - دانشکده علوم 1390
  فاطمه پورسعید اصفهانی   غلامرضا شریفی سیرچی

چکیده اخیراً در دنیا، القای موتاسیون با روش های شیمیایی و فیزیکی به عنوان یک روش پر کاربرد برای اصلاح خصوصیات مورد نظر و ایجاد واریته های جدید در گیاهان زینتی استفاده شده است . صنعت تولید گل در دنیا صنعتی زنده است که رونق آن نیازمند نوآوری و ورود ارقام جدید است. مارگریت (chrysanthemum-superbum)گیاهی بوته ای، دائمی و دارای گلهای سفید است. در این طرح به منظور تعیین اثرات موتاژن های فیزیکی و شیمیایی در جهت ایجاد تنوع در صفات مورفولوژیکی، بیوشیمیایی و مولکولی گل مارگریت از اشعه گاما، اتیل متیل سولفانات و سدیم آزاید استفاده شد و خصوصیات مورفولوژیکی ، بیو شیمیایی و مولکولی ارزیابی شد. به طور کلی اعمال تیمارهای اشعه گاما در دوز های بالا و اتیل متیل سولفانات بادوز 7/0 درصد باعث کاهش درصد جوانه زنی شد. تیمار اتیل متیل سولفانات در دوزهای اعمال شده در سرعت جوانه زنی تأثیر به خصوصی نداشت ولی سدیم آزاید در دوزهای 5/0 و 1 میلی مولار باعث کاهش سرعت جوانه زنی شد. اعمال تیمار اشعه گاما 300 gy باعث کاهش در طول ساقه چه شد، در صورتی که اعمال تیماراتیل متیل سولفانات با دوز 0.1% باعث افزایش طول ساقه چه شد. اعمال تیمارهای سدیم آزاید با دوز 1و 5 میلی مولار نسبت به گیاهان شاهد، افزایش در طول ساقه چه را نشان دادند. اعمال اشعه گاما در تمامی دوزهای ذکر شده ،اعمال تیمار سدیم آزاید 0.5 میلی مولار و تیمار اتیل متیل سولفانات 7/0درصد باعث کاهش وزن تر و وزن خشک گیاهچه شدند. اعمال سایر تیمار ها به جز (تیمارهای سدیم آزاید و اشعه گاما با دوز 50،100 gy و اتیل متیل سولفانات 7/0درصد) با اختلاف معنی داری نسبت به گیاهان شاهد شان باعث کاهش طول ریشه چه شدند.درطی بررسی های گلخانه ای و مزرعه ای موثرترین تیمار بر ای تغییر صفات، دوز های مختلف اشعه گاما بوده که اکثرا اثر کاهشی داشته ولی در بعضی صفات مانند وزن تر وخشک ریشه و ساقه در دوز 300gy به صورت قابل توجهی، اثر افزایشی از خود نشان داده است. در گیاهان گلخانه ای تیمار سدیم آزاید 5میلی مولار نسبت به سایر تیمارها به طور موثری در بعضی صفات مانند وزن تر وخشک ریشه و ساقه و پهنای پوششی بوته اثر داشته و اصولاً این تغییرات به صورت کاهشی بوده است. تیمار اتیل متیل سولفانات به طور کلی کمترین اثر را بر روی صفات مورفولوژیکی داشت ولی در بعضی صفات نیز دوز 1/0و7/0درصد آن اثر کاهشی، به شدت اعمال اشعه گاما نشان داد. در بررسی های مزرعه ای در بعضی صفات مانند وزن خشک و تر قسمت هوایی بوته به طور مشخص اتیل متیل سولفانات با دوزهای 1/0و3/0درصد و سدیم آزاید 1میلی مولار اثر کاهشی مشابه به هم نشان دادند. به منظور بررسی های بیوشیمیایی، خصوصیاتی از قبیل میزان آنتوسیانین، کلروفیل، فلاونوئید و پروتئین اندازه گیری شد. اشعه گاما با دوز 50 gyباعث کاهش میزان آنتوسیانین و استفاده از اشعه گاما با دوز150gy باعث افزایش میزان آنتوسیانین در گیاهان مزرعه ای شد. تیمارهای جهش زای سدیم آزاید و اتیل متیل سولفانات و اشعه گاما در دوزهای اعمال شده باعث کاهش میزان آنتوسیانین در گیاهان گلخانه ای شد و در بین آنها اتیل متیل سولفانات در دوزهای 1/0و3/0درصد اثر کاهشی قوی تری نسبت به سایر تیمارها داشت. تیمار اتیل متیل سولفانات 7/0درصد باعث کاهش چشمگیری در میزان کلروفیل در برگ شد. تیمار اشعه گاما با دوزهای 100و200gy باعث افزایش در میزان کاروتنوئید برگ شد و استفاده از تیمار اتیل متیل سولفانات 1/0، باعث کاهش در میزان کاروتنوئید برگ شد. تیمار اتیل متیل سولفانات 7/0درصد باعث کاهش چشمگیری در میزان این رنگیزه در برگ شد و همچنین اعمال تیمار اشعه گاما با دوزهای 100،200و300gy باعث افزایش در میزان این رنگیزه شد. اشعه گاما با دوز 150gy باعث افزایش در میزان فلاوونوئید موجود در برگ گیاهان گلخانه ای و اتیل متیل سولفانات با دوز 7/0درصد باعث کاهش آن شد.اشعه گاما با دوز 150gy باعث کاهش فلاونوئید موجود در برگ گیاهان مزرعه ای شد. اشعه گاما با دوز 300 gyو اتیل متیل سولفانات با دوزهای 1/0 و 7/0 درصد باعث افزایش میزان پروتئین موجود در برگ گیاهان گلخانه-ای شد و اشعه گاما با دوز 150و200gy و سدیم آزاید با دوز 1میلی مولار باعث کاهش در میزان پروتئین موجود در برگ گیاهان گلخانه ای شد. تیمارهای جهش زای اتیل متیل سولفانات و سدیم آزاید تغییرات چشمگیری در میزان پروتئین موجود در برگ گیاهان مزرعه ای ایجاد نکرد ولی اشعه گاما با دوز 300gy باعث کاهش میزان پروتئین شد. با مطالعه تنوع ژنتیکی ناشی از جهش در این گیاه با استفاده از نشانگرهای issr و rapd ،نتایج به این شکل بود که 12تیمار موجود در سطح تشابه 89/0 درصد به 4 گروه تقسیم بندی شدند و دامنه تشابه ژنتیکی از 79/0 الی 98/0 بود. نتایج حاصل از این تحقیق نشان داد که نشانگرهای rapd و issr قدرت تمایز خوبی را به منظور تعیین تنوع ژنتیکی نشان داده است. بیشترین تغییرات توسط اولین مولفه اصلی با میزان 28/26 % توجیه شد و حدود 3/19 % تغییرات توسط مولفه دوم و 71/15% از تغییرات توسط مولفه سوم توجیه شده است. با استفاده از اطلاعات به دست آمده از پلات دو بعدی و سه بعدی به دست آمده می توان ژنوتیپ ها را در 4 گروه متفاوت گروه بندی کرد که این گروه بندی با گروه بندی حاصل با دندوگرام مطابقت دقیق دارد. کلمات کلیدی مارگریت، موتاسیون، اشعه گاما، سدیم آزاید، اتیل متیل سولفانات ، نشانگرهای ملکولی issr ، rapd

تاثیر برخی مواد شیمیایی و عصاره های گیاهی بر رشد و تکثیر myzus persicae روی گیاه باقلا و بررسی تغییر بیان ژن کیتیناز آن
پایان نامه وزارت علوم، تحقیقات و فناوری - دانشگاه شهید باهنر کرمان - دانشکده کشاورزی 1390
  عاطفه نایب زاده   غلامرضا شریفی سیرچی

چکیده شته سبز هلو(myzus persicae) یکی از مهمترین آفات درختان میوه هسته دار مانند هلو و آلو است. همچنین این آفت به محصولات زراعی یکساله از قبیل باقلا, گوجه فرنگی, سیب زمینی, کلم و علف -های هرز نیز حمله می کند. تا کنون, برای کنترل این آفت از مواد شیمیایی استفاده می شد. این مواد برای محیط زیست بی ضرر نیستند. در این تحقیق از مواد گیاهی برای کنترل این آفت استفاده شده است و البته اثر چند ماده شیمیایی بر روی رشد و تکثیر این آفت بررسی شده است. برای کنترل بهتر این آفت, گیاهان باقلا توسط این شته آلوده شدند و بعد با مواد زیر تیمار شدند : sa نیم میلی مولار, ویتامین b6, ویتامین c, چای سبز, sa یک میلی مولار, عصاره پوست انار, baba, ویتامین b1, آب مقطر (به عنوان شاهد) آزمایشات گلخانه ای نشان داد که تیمارهای baba, چای سبز, sa یک میلی مولار, عصاره پوست انار از رشد و نمو شته ها ممانعت کردند. تحقیقات نشان داد که اثرات ممانعتی این مواد نتیجه تقویت کردن ظرفیت دفاعی گیاه بود. برای پشتوانه این ادعا, ژن کیتیناز گیاه باقلا به عنوان سیگنال دفاعی مورد مطالعه قرار گرفت. آنالیز بیان ژن کیتیناز (pr3) افزایش سطح mrna بعد از تیمار با این مواد را نشان داد.

توالی‏یابی ژن همساخت floricaula/leafy در .solanum villosum mill و بررسی بیان آن در برخی از اندام ها
پایان نامه وزارت علوم، تحقیقات و فناوری - دانشگاه شهید باهنر کرمان - دانشکده علوم 1391
  محسن اسدی خانوکی   غلامرضا شریفی سیرچی

گیاهان گلدار یا نهاندانگان بزرگترین گروه گیاهان را تشکیل می دهند. تولید مثل موفق این گیا هان بستگی به توانایی آن ها در نمو گل دارد. در طی دوره های مختلف رشد یک گیاه، گذر از فاز رویشی به فاز زایشی یکی از مهم ترین مراحل است که به آن گذر به گل دهی می گویند. ژن leafy در پیشبرد مرحله گذر به گل دهی و نیز تعیین هویت مریستم رأسی نقش ایفا می کند. این ژن با هماهنگ کردن سیگنال های محیطی و درونی موجب تنظیم زمان گل دهی می شود. هدف از این تحقیق شناسایی این ژن در گونه ای تاجریزی به نام روپاس (solanum villosum mill.) بود. بدین منظور آغازگر های اختصاصی طراحی و در واکنش های pcr و rt-pcr مورد استفاده قرار گرفت. نتایج نشان دهنده طول بیش از 1200 نوکلئوتیدی ناحیه کدکننده و بیش از 3000 نوکلئوتیدی ژن در ژنوم گیاه بود. 1626 نوکلئوتید از این ژن که شامل بخش هایی از اگزون 2 و طول کامل اگزون 3 و اینترون 2 می باشد، تعیین توالی گردید. مقایسه توالی پروتئین استنباطی 540 نوکلئوتید از ناحیه کدکننده این ژن، با پروتئین های همساخت leafy در سایر گیاهان نشان دهنده شباهت بین 52 تا 98 درصدی آن ها بود. بررسی بیان ژن در اندام های گوناگون حاکی از بیان در مریستم رأس شاخساره رویشی و زایشی، برگ و ساقه جوان و همچنین غنچه های گل و گل های باز شده بود.

ارزیابی تنوع ژنتیکی جمعیت های گیاه دارویی مورد (myrtus communis) بر اساس مارکر مولکولی issrوتجزیه و تحلیل اسانس آن
پایان نامه وزارت علوم، تحقیقات و فناوری - دانشگاه شهید باهنر کرمان - دانشکده کشاورزی 1391
  مهتاش دریانی زاده   وحید روشن سروستانی

به منظور ارزیابی تنوع ژنتیکی جمعیت های گیاه موردmyrtus communis l. ، تعداد 12 سایت از 54 منطقه برای نمونه برداری انتخاب شدند، اسانس ها با استفاده از کروماتوگرافی گازی (gc) و گاز کروماتوگرافی متصل به طیف سنج جرمی (gc / ms) از نمونه های برگ خشک به دست آمد . در مطالعه حاضر، از نرم افزار مینی تب (v 14) استفاده گردید. ترکیبات عمده اسانس نشان دهنده تنوع با تغییر در ارتفاع است. در ارتفاعات پایین، وسط و ارتفاعات بالاتر، اجزای تشکیل دهنده اصلی اسانس، به ترتیب، ?-پینن، 1،8-سینئول، لینالول،?-ترپینئول و لیمونن بود. در ارتفاعات پایین تر از کازرون (792 متر) و سیمکان جهرم (889 متر)، ?-پینن (48.7 درصد)، 1،8 سینئول (? 24.3)،لینالول (7.5 درصد) و ?-ترپینئول (3.9?) از ترکیبات عمده اسانس بودند، از سوی دیگر، درصد ?-پینن با افزایش ارتفاع کاهش می یابد. در ارتفاعات متوسط، اسلام آباد (1284 متر) و آتشکده فیروز آباد (1349 متر)، ?-پینن به ترتیب 27.1? و 21.8? کاهش داشته است، حداکثر مقدار لیمونن (11.9?) در رستاق مشاهده شد (1417 متر) و حداکثر لینالول (28?) در ارتفاع 1349 متر آتشکده فیروز آباد شناسایی شد. بر اساس دندروگرام به دست آمده در این مطالعه مناطق مورد بررسی به سه گروه تقسیم شدند،و به منظور تعیین تنوع ژنتیکی جمعیت های این گیاه با استفاده از نشانگر rapd در ابتدا استخراجdna و سپس واکنشpcr صورت گرفت. برای بررسی چند شکلی dna بین جمعیت های گیاه مورد در پژوهش حاضر از 28 آغازگر10 نوکلئوتیدی استفاده گردید که در تمامی آغازگرها شاهد باندهایی با وضوح بسیار پایین و یا عدم وجود باند بودیم و هیچ یک از آغازگرها نوارهای چند شکل تکرارپذیر تولید نکردند. و در نهایت با آزمایش تعدادی آغازگرهای issr شاهد نوارهای چند شکل بودیم از میان 23 آغازگر انتخاب شده و آزمایش شده ، 3 آغازگر16: (gaca)5 14: cca(ct)8 5: ag)8yt) نوارهای چند شکل، واضح و قابل نمره دهی را تولید کردند . آغازگر (gaca)5 بیشترین تعداد نوار چند شکل و یا به عبارت دیگر بالاترین درصد چند شکلی و آغازگرهای cca(ct)8 و ag)8yt) کمترین درصد چند شکلی را به خود اختصاص داده بودند. با این آغازگرها، در مجموع 24 آلل تولید شد که از این تعداد 8 نوار چند شکلی نشان دادند و 16 نوار یک شکل یا مونومورف بودند. بر اساس دندوگرام جمعیت های گیاه مورد در سه گروه قرار گرفتند.

ارزیابی تنوع ژنتیکی وفیتوشیمیایی ژرم پلاسم انار (punica granatum) استان کرمان با استفاده از نشانگرهای مولکولی و کروماتوگرافی
پایان نامه وزارت علوم، تحقیقات و فناوری - دانشگاه شهید باهنر کرمان - دانشکده کشاورزی 1392
  سارا خسروی   امین باقی زاده

به منظور بررسی تنوع ژنتیکی و فیتوشیمیایی ژرم پلاسم اناراستان کرمان تعداد2? ژنوتیپ، از مناطق باغین، بافت، بردسیر، بلورد، بم، جوپار، جیرفت، چترود، رابر، راور، رفسنجان، زرند، سیرجان، سیرچ، شهداد، کرمان، کهنوج،کوهبنان، ماهان ومنوجان جمع آوری شد و درفریزر2? - نگهداری شد. در آزمایشگاه با استفاده از روش ctab با کمی تغییرات، استخراج dnaصورت گرفت. به منظور بررسی مولکولی از ??آغازگر rapd و ?آغازگر issrجهت انجام pcr، استفاده شد. پس از انجام الکتروفورز???باند ایجاد شدکه در محدوده 240تا 2800 جفت باز قرار داشتند که???تای آنها (??درصد) چند شکلی نشان دادند. اطلاعات بدست آمده توسط نرم افزار ntsys (2.02 ver ) و به روش upgma با ضریب تشابه دایس آنالیز شدند. تجزیه کلاستر بدست آمده ،2?ژنوتیپ مورد مطالعه را در ? گروه جایابی کرد. کلاستر حاصله تا حدودی با تنوع جغرافیایی همخوانی داشت. تجزیه به مولفه های اصلی انجام شد و پلات های دوبعدی و سه بعدی رسم گردید. نتایج این تحقیق نشان داد که استفاده از نشانگرهای rapd و issr برای ارزیابی تنوع مولکولی بین این ژنوتیپ ها مناسب می باشد. به منظور بررسی تنوع شیمیایی ? نمونه پوست انار( ترش کوهبنان، شیرین چترود و ملس ماهان) که به طور تصادفی انتخاب شدند با استفاده از روش تقطیر با آب توسط دستگاه کلونجر از آنها اسانس گیری به عمل آمد و با استفاده از دستگاه gc/ms تجزیه و شناسایی اسانس آنها انجام گرفت. نتایج نشان داد که 20 ماده فقط در انار ترش کوهبنان از جمله ecosane ، methyl tetradecanate ،linoleic acid ،... وجود داشت که در انارهای دیگر نبود. ماده های cedrene، curcumene،dillapiole ، geranyl acetone فقط در انار شیرین چترود وجود داشت. ماده های farnesene alpha و tetradecanalفقط در انار ملس مشاهده شد.

ارزیابی تنوع ژنتیکی جمعیت های مختلف گیاه ترتیزک (lepidium sativum) براساس مارکر مولکولی rapd و تجزیه و تحلیل اسانس آن
پایان نامه وزارت علوم، تحقیقات و فناوری - دانشگاه شهید باهنر کرمان - دانشکده کشاورزی 1392
  فائزه السادات مرتضوی مقدم   غلامرضا شریفی سیرچی

ترتیزک گیاهی از خانواده crucifera و با نام علمی l. lepidium sativum می باشد. این گیاه بصورت تازه در سوپ و سالادمصرف دارد بعلاوه، بطور گسترده در طب سنتی مصرف می گردد. در این تحقیق تنوع ژنتیکی میان 15 جمعیت از ایران و دو جمعیت از کشور چین مورد ارزیابی قرار گرفت. برای این منظور،از برگ های هر جمعیت dna به روش ctab استخراج گردید. با استفاده از 8 آغازگر rapd، در مجموع 69 باند واضح و تکرارپذیر تولید گردید که 65% آن هاچندشکل بودند. تجزیه خوشه ای، 17 جمعیت مورد مطالعه را به 4 گروه اصلی تقسیم نمود. بیشترین ضریب تشابه ژنتیکی میان جمعیت های ماهان و خمینی شهر (با تشابه ژنتیکی 95/0)بود. ترکیبات اسانس دو نمونه البرز و شهریار به وسیله دستگاه gc/ms شناسایی شدند، 16 ترکیب با شباهت بیش از 90 حاصل گردید. بیشترین ترکیب تشکیل دهنده هر دو اسانس بنزیل نیتریل بود که در نمونه البرز به میزان 26/44% و در نمونه شهریار به میزان 7/70% وجود داشت. در اسانس شهریار کارواکرول به میزان 52/6% بود در صورتی که دراسانس البرز این مقدار 99/0% بود، در اسانس شهریار ماده پلاژیون به میزان 45/4% و در اسانس البرز به میزان 66/2% وجود داشت.

ایجاد مقاومت القایی در گیاه کدو (cucurbita pepo) نسبت به بیماری سفیدک پودری (podosphaera xanthii)
پایان نامه وزارت علوم، تحقیقات و فناوری - دانشگاه شهید باهنر کرمان - دانشکده کشاورزی 1390
  رویا ضیغمی نژاد   غلامرضا شریفی سیرچی

سفیدک پودری کدو با عامل podospharea xanthii یکی از بیماریهای مهم و جدی در خانواده کدوییان می باشد. کنترل شیمیایی این بیمارگر به دلیل ایجاد مقاومت به قارچ کس ها چندان موثر نمی باشد. در جدیدترین و مدرن ترین شیوه مبارزه با آفات، بیماری ها و استرس های محیطی مقاوم سازی گیاه از طریق فعال سازی ژن ها ی مرتبط با سیستم دفاعی به جای کاربرد سموم شیمیایی با اثرات سوء زیست محیطی به کار گرفته می شود. در این مطالعه اثرات ترکیبات شیمیایی مثل اسید سالیسیلیک (sa) و بتاآمینوبوتریک اسید (baba) در فعال سازی سیستم دفاعی گیاه در برابر بیمارگر مربوطه مورد بررسی قرار گرفت. ابتدا گیاهان کدو در مرحله 3 الی 4 برگی با غلظت های مختلف مواد القا کننده ی مقاومت مانند baba(دو و چهار میلی مولار)، sa (در دو غلظت نیم و یک دهم میلی مولار) و آب مقطر استریل ( به عنوان کنترل) تیمار شدند. گیاهان تمیار شده پس از 24 ساعت با 50 میکرولیتر از سوسپانسیون اسپور قارچ مایه زنی گردیدند و تحت شرایط گلخانه ای نگهداری شدند. نتایج آنالیز مولکولی نشان از افزایش بیان ژن pr-i در ساعات مختلف بعد از مایه زنی داشت. گیاهان تیمار شده با sa یک دهم میلی مولار در 72 ساعت و تیمارهای baba چهار میلی مولار بیشترین بیان را در 48 ساعت پس از مایه کوبی نشان می دهند. نتایج حاصل از بررسی فعالیت آنزیم های آنتی اکسیدانت در گیاهان تحت تنش نشان داد که غلظت های نیم و چهار میلی مولار sa، baba به ترتیب به طور معناداری باعث افزایش فعالیت gpx، 48 و 72 ساعت پس از مایه زنی می شوند. همچنین فعالیت pal در 72 ساعت پس از مایه زنی در تمامی تیمارهای بکار رفته، معنی دار بود. چنین به نظر می رسد که sa و baba از طریق فعال سازی مسیر سیگنالی مقاومت، سبب ایجاد مقاومت به بیماری سفیدک پودری می شوند.

بررسی تنوع مولکولی و مورفولوژیکی چند جمعیت بومادران(achillea wilhelmsii) بومی استان هرمزگان و بررسی تنوع ترکیبات اسانس آنها
پایان نامه وزارت علوم، تحقیقات و فناوری - دانشگاه گیلان - دانشکده علوم کشاورزی 1393
  انسیه طاهری   غلامرضا شریفی سیرچی

چکیده ایران دارای ذخایر ارزشمند ژنتیکی از بسیاری گیاهان دارویی می باشد. نظر به اهمیت و کاربردهای مختلف گیاهان دارویی، امروزه بسیاری از تحقیقات علوم گیاهی به جنبه های مختلف کاربردی این گیاهان معطوف شده است. بومادران یکی از گیاهان دارویی معروف ایران و جهان می باشد و سالیان زیادی است که توسط ملیت های متعدد مورد استفاده قرار می گیرد. بنابراین تحقیق حاضر، با هدف بررسی تنوع مورفولوژیکی، مطالعه ی روابط ژنتیکی با استفاده از نشانگرهای rapd و شناسایی و مقایسه درصد و اجزای اسانس گونه achillea wilhelmsii رویش یافته در نقاط مختلف ارتفاعی در استان هرمزگان، انجام شد. نتایج بررسی خصوصیات مورفولوژیکی در نمونه های جمع آوری شده بومادران، حکایت از تنوع آن ها در تمامی صفات مورد بررسی داشت که نوید بخش پتانسیل بهره وری این ژنوتیپ ها در به نژادی می باشد. بررسی پتانسیل تنوع ژنتیکی به وسیله نشانگر مولکولی rapd نیز صورت گرفت که نتایج مناسبی جهت تفکیک توده های بومادران ارائه داد. به طوری که تجزیه خوشه ای بر اساس ضریب فاصله جاکارد و الگوریتم های رسم دندروگرام upgma و rb و پس از آن تجزیه به مختصات اصلی، به خوبی توانست توده های بومادران را تفکیک کند. نتایج بررسی ویژگی های اسانس توده های مورد مطالعه نشان دهنده تفاوت بالای بین تمامی توده ها در ترکیبات اسانسی بود، به طوری که توده شمال استان دارای بیشترین تعداد ترکیب بود در حالی که توده شرق و توده غرب به ترتیب دارای دومین و سومین جایگاه از لحاظ میزان ترکیبات بودند. به طور کلی نتایج این آزمایش حاکی از تنوع بالا بین توده -های بومادران در سطح استان هرمزگان است، و توده های مورد بررسی چه از لحاظ صفات مورفولوژیکی چه خصوصیت های نشانگری و چه از لحاظ ترکیبات اسانسی دارای تفاوت می باشند. این مطلب حاکی از پتانسیل های نهفته توده های بومی بومادران در ناحیه استان هرمزگان دارد.

بررسی تنوع ژنتیکی گیاه علف لیمو براساس مارکر مولکولی rapd و تجزیه و تحلیل اسانس آن
پایان نامه وزارت علوم، تحقیقات و فناوری - دانشگاه شهید باهنر کرمان - دانشکده کشاورزی 1391
  زینب حمزه کهنوجی   غلامرضا شریفی سیرچی

مطالعه جمعیت های یک گونه هم از جنبه گونه زایی و هم از نظر تاکسونومی مورد توجه محققین می باشد. اگر چه این مطالعات بیشتر جنبه مورفولوژیک داشته است و در حال حاضر بیشتر بر اساس تفاوت های ژنتیکی بین جمعیت ها استوار است. در این مطالعه چهار جمعیت گیاه علف لیمو cymbopogon olivieri از مناطق بنگود و زرچین در استان کرمان و باغات و شهداد در استان هرمزگان مورد بررسی قرار گرفتند. میزان اسانس چهار جمعیت مختلف گیاه علف لیمو اندازه گیری شد و نتایج نشان داد که بین میزان اسانس و ارتفاع از سطح دریا در مواردی همبستگی مثبت وجود دارد و گاهی اوقات همبستگی دیده نمی شود

کلونینگ و مهندسی ژن انسولین نوترکیب مومر و ساخت کاست آن در یک وکتور دوگانه
پایان نامه وزارت علوم، تحقیقات و فناوری - دانشگاه شهید باهنر کرمان - دانشکده کشاورزی 1391
  بهناز حسینی   غلامرضا شریفی سیرچی

گسترش دیابت در جهان با افزایش قابل توجه ای در دهه های آینده پیش بینی شده است. میزان شیوع این بیماری در کشور ایران نیز هر ساله در حال افزایش است و جان هزاران نفر بیمار را تهدید می کند. پروتئین دارویی آسپارت یکی از آنالوگ های دارویی اصلی برای درمان دیابت است که نسبت به انسولین لیسپرو زمان اوج سریع تری دارد و می توان از آن در پمپ های انسولین، خودکار انسولین و در روش تزریق استفاده کرد. در این تحقیق طراحی و بهسازی ژن آسپارت برای اولین بار در ایران صورت گرفت و همچنین برای تراریخت نمودن گیاه آرابیدوپسیس تالیانا از دو نژاد اگروباکتریوم eha101 و c58(pgv3101) که حاوی پلاسمید دوگانه pjawohl iii حامل ژن های انسولین مونومر آسپارت بود استفاده شد. در این آزمایش گیاهان در مرحله گلدهی توسط اگروباکتریوم با روش غوطه ورسازی گل آذین تیمار شدند صحت حضور ژن انسولین مونومر آسپارت با استفاده از تکنیک استخراج dnaو واکنش زنجیره ای پلیمراز مورد تاَیید قرار گرفت. نتایج حاصل از تراریخت شدن گیاه آرابیدوپسیس با پلاسمید pjawohl iii حاوی ژن انسولین آسپارت نشان داد که باکتری eha 101 کارایی بالاتری در انتقال ژن دارد

جداسازی، کلونینگ و تعیین توالی پروتئین انتقال دهنده هگزوز2 (hxt2p) در ساکارومایسس سرویزیه سویه ایرانی
پایان نامه وزارت علوم، تحقیقات و فناوری - دانشگاه شهید باهنر کرمان - دانشکده کشاورزی 1388
  صالح امیری   محمد حسن فولادی

وابستگی کشورهای پیشرفته به نفت و وقوع بحرانهای نفتی در دهه 1970 به علت فزونی مصرف بر تولید و افزایش فوق العاده قیمت نفت کشورهای صنعتی را بر آن داشته که با مساله انرژی برخورد متفاوتی کنند. در حال حاظر اتانول می تواند به عنوان یک منبع قابل اعتماد سوخت مطرح باشد. اتانول در هر کشوری با توجه به منابع آن کشور قابل تولید است مثلاً در ایران از ملاس در آمریکا از ذرت در اروپا از سیب زمینی و غیره.... اتانول بدست می آورند. در فرآیند تخمیر الکل علاوه بر بهینه سازی محیط کشت و همچنین پارامترهای موثر بر تخمیر الکلی باید به میکروارگانیسم، تبدیل کننده قند به الکل نیز توجه کرد. بطوری که از طریق مهندسی ژنتیک می توان اقدام به دستکاری ژنتیکی میکروارگانیسم کرد تا از این طریق میزان تولید الکل را بهینه کنیم. در طول تخمیر مقدار زیادی هگزوز ( l/ g160 -300 ) از جمله گلوکز و فروکتوز به نسبت مساوی تبدیل به الکل ودی اکسید کربن می شوند. ساکارومایسس سرویزیه دارای 20 ژن انتقال دهنده هگزوز ( hxt) می باشند که انتقال هگزوزهایی مانند گلوکز، فروکتوز و مانوز را از طریق انتشار تسهیل شده بر عهده دارند که با بیان این ژن ها می توان میزان تولید الکل را طی فرآیند تخمیر توسط ساکارومایسس سرویزیه افزایش داد. خانواده انتقال دهنده هگزوز در مخمر شامل پروتئین های ,gal2p ,hxt1p-hxt17p snf3pو rgt2pمی باشند. snf3p و rgt2p پروتئین های همولوگ هستند که بعنوان دریافت کننده ( حسگر ) هگزوز خارج سلولی عمل کرده و سیگنال درون سلولی را جهت تحریک بیان ژنهایhxt ایجاد می کنند. هر دو این ژنها در سطوح خیلی کمی بیان می شوند و به عنوان حسگر گلوکز با میل ترکیبی پایین عمل می کنند. الگوی بیان این ژنها به شدت تابع ویژگی های کینتیک انتقال دهنده ها می باشد. بطوریکه hxt1p در شروع تخمیر بیان شده و در طی فرآیند تخمیر نقشی ندارد. حمل کننده hxt3p در سرتاسر طول تخمیر فعال بوده و حداکثر بیان را در هنگام توقف رشد نشان می دهند و hxt6p وhxt7p حمل کننده های با میل ترکیبی بالا هستند که میزان بیان شبیه به هم دارند. که این حمل کننده ها در فاز سکون رشد مخمر، بیانشان تحریک شده و در طی این فاز بیان ثابتی دارند. پایداری بیان بیشتر این ژنها حتی در کمبود نیتروژن نیز بالا است. انتقال دهنده hxt2p به طور موقتی در طول فاز تاخیر بیان شده و حداکثر بیان را در آغاز تخمیر نشان می دهند. هدف از این مطالعه بررسی میزان تولید الکل از طریق بیان بیشتر ژنهای hxt میباشد. چون در غلظت کم گلوکز، مخمر دچار گرسنگی شده و بهره دهی به شدت کم می شود و با افزایش بیان ژنهای hxt می توان میزان تولید الکل را بهینه کرد. در این تحقیق پس از تهیه پرایمرهای اختصاصی قطعه ای از ژن مورد نظر با روش pcr تکثیر یافت و با استفاده از ژل آگاروز محصول pcr را الکتروفروز کرده و اندازه ژن تکثیر شده را با استفاده از نشانگر تعیین کردیم. محصولpcr را با استفاده از کیت تجاری خالص سازی کرده و سپس به کمک آنزیم t4 dna ligase محصولpcr را به داخل وکتور ptz57r/t درج کردیم. پس از انتقال ptz57r/thxt2 به درون باکتری حد واسط استرین dh5α اشیرشیاکلی ، پلاسمید نوترکیب با روش هضم آنزیمی و نرم افزاری مورد ارزیابی قرار گرفت. ژن hxt2 به طول 1621 جفت باز، با توالی صحیح کلون گردید. هضم آنزیمی با موفقیت انجام شد. بدین ترتیب که ژنhxt2 به طور کامل از پلاسمید جدا گردید. نتایج نشان داد که وکتور ptz57r/t و استرین dh5? اشیرشیاکلی بکار رفته در این تحقیق برای نگهداری ژن hxt2 مناسب می باشد. بررسی نرم افزاری حاکی از آن بود که این ژن پروتئینی به وزن مولکولی 59/840کیلو دالتون را کد کرده و دارای 541 اسید آمینه و نقطه ایزوالکتریک 8/3 می باشد. در این مطالعه ژن hxt2 از طریق بهینه سازی pcr از سویه ساکارومایسس سرویزیه ایرانی جدا و در یک میزبان پروکاریوتیک کلون کردیم. این اولین گزارش از جداسازی و کلونینگ این ژن از طریق مهندسی ژنتیک درایران است که می تواند برای کلونینگ در وکتور بیانی به منظور افزایش راندمان تولید الکل طی فرآیند تخمیر الکلی به کار برده شود.