بررسی اثر پروتئولیتیکی آنزیم های تریپسین و کیموتریپسین بر تجمع های لیزوزیمی

برخی از بیماری¬ها مانند بیماری آلزایمر و آمیلوئیدی شدن لیزوزیم ناشی از تشکیل تجمع¬های پروتئینی هستند. پپتیدازهای تجزیه کننده¬ی آمیلوئید بتا مانند نپریلایزین و آنزیم تجزیه کننده¬ی انسولین می¬توانند تجمع¬های آمیلوئید بتا را تجزیه کنند. در این پروژه به بررسی اثرات پروتئولیتیکی آنزیم¬های تریپسین و آلفا- کیموتریپسین روی تجمع¬های لیزوزیمی پرداخته شد. روش طیف¬سنجی فلورسانس و میکروسکوپ نیروی اتمی برای مشاهده¬ی اثر پروتئولیتیکی این آنزیم¬ها مورد استفاده قرار گرفت. ابتدا شرایط لازم برای تشکیل تجمع¬های پروتئینی لیزوزیم فراهم شد: دمای 54 درجه¬ی سانتی¬گراد ،2 ph و 24 ساعت انکوباسیون همراه با تکان دادن (150 دور در دقیقه) و غلظت 2 میلی¬گرم بر میلی¬لیتر محلول لیزوزیم. سپس اثر دو آنزیم فوق، قبل و بعد از تشکیل تجمع توسط لیزوزیم و همچنین بر لیزوزیم دناتوره شده توسط گوانیدین تیوسیانات مورد بررسی قرار گرفت. در این پروژه ما شاهد کاهش نشر فلورسانس و کاهش تجمع با اضافه کردن آنزیم¬های فوق به لیزوزیم تجمع¬یافته و لیزوزیم دناتوره شده توسط گوانیدین تیوسیانات بودیم. در لیزوزیم هیدرولیز شده توسط تریپسین افزایش نشر فلورسانس و افزایش تجمع¬پذیری را مشاهده کردیم، اما در لیزوزیم هیدرولیز شده توسط آلفا- کیموتریپسین کاهش چشم¬گیری در نشر فلورسانس و تجمع¬پذیری مشاهده شد. نتایج این مطالعه می¬تواند در بررسی اثر آنزیم¬های پروتئولیتیک بر تجمع¬های پروتئینی و پپتیدی به کار آید.