طراحی نسل جدید وکتور بیانی مشتق از pcold i با توانمندی بالا برای کلون سازی و بیان نانوپپتید ها

امروزه پپتید های ضدمیکروبی به دلیل درک کاربردهای بسیار گسترده آن ها، تحت عنوان آنتی بیوتیک های نسل جدید نام برده می شوند. مقادیر زیادی از پپتید های با درجه خلوص بالا به منظور تحقیقات پایه و آزمایش های بالینی مورد نیاز می باشند. در مقایسه با فرایند جداسازی از منابع طبیعی و سنتز شیمیایی، رویکرد بیان نوترکیب ابزاری سودمند و اقتصادی برای تولید پپتید در مقادیر بالا محسوب می شود. با این وجود؛ طول کوتاه پپتیدهای ضدمیکروبی، یک عامل محدودکننده در راستای تحقق این رویکرد می باشد. دلیل این امر اضافه شدن یک یا چند آمینواسید در حین فرایند کلون سازی می باشد که منجر به از دست رفتن فولدینگ اصلی پپتید شده و تأثیر بسزایی در کاهش میزان عملکرد آن می گذارد. هدف از این تحقیق طراحی مکانیسمی جهت تغییر ساختمان وکتور pcold i به منظور بیان اختصاصی و کامل پپتیدهای ضدمیکروبی (بدون هیچ گونه آمینواسید اضافی در انتهای آمینی) با استفاده از روش جهش زایی مختص جایگاه می باشد. در واقع طراحی روش و تغییر در ساختار وکتور باید به گونه ای صورت گیرد که جایگاه برشی نخستین آنزیم محدودگر در جایگاه mcs در سطح نوکلئوتیدی با جایگاه عملکردی فاکتور xa در سطح آمینواسیدی یکسان باشد. توالی tee، برچسب هیستیدینی و جایگاه برش فاکتور xa توسط فاکتور xa حذف شده و هیچ آمینواسید اضافی در انتهای آمینی باقی نمی ماند. بر این اساس این وکتور تغییر یافته می تواند برای کلون سازی سریع و بسیار آسان و بیان اختصاصی انواع پپتیدهای کوتاه از جمله پپتیدهای ضد میکروبی و پپتیدهای ضد آنژیوژنز، ضد سلول های بنیادی سرطانی و ضد سلول های متاستازی استفاده شود.