جداسازی، همسانه سازی و بیان فاکتور سلول بنیادی با استفاده از سیستم بیانی پروکاریوتی
چکیده
چکیده سابقه و هدف فاکتور سلول بنیادی(scf)، یک گلیکوپروتئین 28 تا 40 کیلودالتونی است که نقش مهمی را در تکثیر و تمایز سلولهای بنیادی خونساز(hscs) بازی میکند. هدف این مطالعه جداسازی، کلونینگ و بیان scf در میزبان بیانیrosetta بود. rosetta علاوه بر ویژگیهای میزبان بیانی پروکاریوتی، انتظار می رفت با فراهم کردن کدونهای نادر پروتئینهای یوکاریوتی، سطح بیان پروتئین نوترکیب را افزایش دهد. مواد و روش ها مطالعه انجام از نوع تجربی بود. rna تام از سلول های hela استخراج و به دنبال آن cdna ساخته شد. توالی رمزکننده scf ، به وسیله آغازگرهای اختصاصی جداسازی و تکثیر شد و با استفاده از وکتور بیانی pet-32a در e.coli top 10 همسانه سازی شد. سازه نوترکیب به وسیله pcr ، هضم آنزیمی و تعیین توالی تایید شد. وکتور نوترکیب در میزبان بیانی rosetta تراریخت شد. بیان scf نوترکیب در حضور iptg القا شد. بیان فاکتور سلول بنیادی انسانی(hscf) با sds-page و وسترن بلات ارزیابی و تایید شد. یافته ها توالی رمزکننده scf با موفقیت از سلول های hela جداسازی و در وکتور بیانی pet-32a همسانه سازی و بیان پروتئین نوترکیب در میزبان بیانی rosetta انجام شد. نتیجه گیری در سیستم بیانی rosetta ، امکان تولید پروتئین های یوکاریوتی با کدون های نادر مثل agg ، aga ، aua ، cua ، ccc و gga وجود دارد بنابراین به میزان بالایی پروتئین فاکتور سلول بنیادی تولید می شود.