تولید انبوه آنتی بادی مونوکلونال علیه پپتید خارج سلولی cd۲۰ و ارزیابی اتصال اختصاصی آن به سلول های بیان کننده cd۲۰

کوشان سینه سپهر، koushan sineh sepehr department of immunology, faculty of medicine, tabriz university of medical sciencesدانشگاه علوم پزشکی تبریز، دانشکده پزشکی، گروه ایمنی شناسی پزشکی،سازمان اصلی تایید شده: دانشگاه علوم پزشکی تبریز (tabriz university of medical sciences) بهزاد برادران، behzad baradaran drug applied research center, tabriz university of medical sciences, tabriz, iranمرکز تحقیقات کاربردی دارویی، دانشگاه علوم پزشکی تبریز. تبریز، ایران- تلفن:4113364665سازمان اصلی تایید شده: دانشگاه علوم پزشکی تبریز (tabriz university of medical sciences) جعفر مجیدی، jafar majidi medical immunology department, immunology research center (irc), tabriz university of medical scienceمرکز تحقیقات ایمونولوژی، داشگاه علوم پزشکی تبریز،سازمان اصلی تایید شده: دانشگاه علوم پزشکی تبریز (tabriz university of medical sciences) جلال عبدالعلی زاده، jalal abdolalizadeh clinical biochemistry department, immunology research center (irc), tabriz university of medical scienceمرکز تحقیقات ایمونولوژی، داشگاه علوم پزشکی تبریز،سازمان اصلی تایید شده: دانشگاه علوم پزشکی تبریز (tabriz university of medical sciences)

چکیده

پیش زمینه و هدف: امروزه با پیشرفت فنّاوری هیبریدوما در تولید آنتی بادی های مونوکلونال این امکان فراهم شده که به واسطه این مواد، مارکرهای مختلف سلولی در سطح سلول های نرمال و بدخیم ارزیابی گردد. cd20، فسفوپروتئین غیر گلیکوزیله، یک مارکر مناسب در تشخیص لوسمی و لنفوم ها می باشد که تقریباً در 95 درصد از سلول های b نرمال و بدخیم به جز در سلول های اولیه و پلاسماسل، بیان می گردد. هدف این مطالعه تولید آنتی بادی مونوکلونال برعلیه مارکر cd20 و ارزیابی اتصال اختصاصی آن در سلول های بیان کننده cd20 می باشد.مواد و روش ها: ابتدا موش های balb/c در چهار نوبت با 100 میکروگرم پپتید خارج سلولی cd20، ایمونیزه گردیدند و سپس فیوژن سلول های طحال ایمن ترین موش با سلول های میلومایی sp2/0 به وسیله پلی اتیلن گلیکول( (peg صورت گرفت. کلون مطلوب برای رقت سازی محدود ((limiting dilution انتخاب گردید. تولید انبوه آنتی بادی مونوکلونال به روش مایع آسیت صورت گرفت. تخلیص آنتی بادی مونوکلونال با روش افینیتی کروماتوگرافی پروتئین a انجام شد و با sds-page نیز تأیید گردید. اتصال اختصاصی آنتی بادی با ارزیابی های ایمونولوژیکی مثل الایزا و ایمونوفلورسانس و فلوسایتومتری صورت گرفت.یافته ها: پس از انجام فیوژن سلولی و غربالگری کلون ها، یک کلون مطلوب با جذب نوری((od حدود 2 در آزمون الایزا به دست آمد. با تخلیص مایع آسیت با ستون افینیتی کروماتوگرافی پروتئین a , 5 میلی گرم آنتی بادی مونوکلونال خالص به دست آمد. نتایج sds-page خلوص محصول کروماتوگرافی را تأیید نمود. نتایج الایزا و ایمونوفلورسانس و فلوسایتومتری اتصال اختصاصی به cd20 را نیز تأیید نمود.نتیجه گیری: نتایج نشان می دهد که از آنتی بادی مونوکلونال تولیدشده علیه cd20 می توان در ارزیابی های ایمونولوژیکی نظیر الایزا و ایمونوفلورسانس و فلوسایتومتری استفاده نمود.