جداسازی، تکثیر و غنیسازی سلولهای بنیادی اسپرماتوگونی موش نوزاد در روش همکشتی با سلولهای سرتولی اتولوگ
چکیده
هدف: ارایه یک روش ساده برای جداسازی، تکثیر و غنیسازی سلولهای بنیادی اسپرماتوگونی موش نوزاد مواد و روشها: سوسپانسیون سلولی حاوی سلولهای اسپرماتوگونی و سرتولی با استفاده از هضم آنزیمی از بیضه موش نوزاد دو روزه جداسازی شد. سلولها به صورت همکشتی و در محیط کشت dmem/f12 حاوی 10 درصد سرم به مدت دو هفته کشت داده شدند. ماهیت سلولهای سرتولی و اسپرماتوگونی به ترتیب توسط بیان پروتئینهای ویمنتین وplzf تأیید شد. برای ارزیابی میزان تکثیر سلولهای بنیادی اسپرماتوگونی تعداد کلونیهای تشکیل شده و مساحت آنها در طول دو هفته کشت اندازهگیری شد. در پایان هفته دوم، بیان ژنهای اختصاصی سلولهای اسپرماتوگونی (stra8، piwill2، dazl، mvh) ارزیابی شد. نتایج: نتایج بهدست آمده نشان داد که سلولهای اسپرماتوگونی و سرتولی جدا شده نشانگرهای اختصاصی این سلولها را بیان میکنند. در طی دوره کشت، بین چهار نقطه زمانی اختلاف معنیداری در تعداد و مساحت کلونیهای سلولهای بنیادی اسپرماتوگونی دیده شد (05/0pنتیجهگیری: مطالعه حاضر نشان داد که همکشتی سلولهای اسپرماتوگونی و سلولهای سرتولی با منبع یکسان محیط رشد مناسب و بهینهای را فراهم میکند که بدون اضافه کردن عوامل رشد خارجی و دستکاریهای شیمیایی میتوان از آن برای تکثیر سلولهای بنیادی اسپرماتوگونی استفاده کرد.