جداسازی و بررسی خصوصیات مولکول های s‏cfv ضد her۲ با استفاده از تکنولوژی نمایش فاژی جهت تشخیص سرطان پستان

شاهرخ شاهرخ قوّتی، shahrokh ghovvati ph.d. student of genetics, college of agriculture, ferdowsi university of mashhad, mashhad, iran.institute of biotechnology, ferdowsi university of mashhad, mashhad, iran.visiting researcher at department of medical oncology, fox chase cancer center, philadelphia, pennsylvania, usa.دانشجوی دکترای تخصصی ژنتیک، دانشکده کشاورزی، دانشگاه فردوسی مشهد، مشهد، ایران.محقق، پژوهشکده فناوری زیستی، دانشگاه فردوسی مشهد، مشهد، ایران.محقق، گروه انکولوژی پزشکی، مرکز تحقیقات سرطان فاکس چیس، فیلادلفیا، پنسیلوانیا، ایالات متحده آمریکا.سازمان اصلی تایید شده: دانشگاه فردوسی (ferdowsi university)سازمان های دیگر: مرکز تحقیقات سرطان فاکس چیس، فیلادلفیا، پنسیلوانیا، ایالات متحده آمریکا مجتبی مجتبی طهمورث پور، mojtaba tahmoorespur professor, department of genetics, college of agriculture, ferdowsi university of mashhad, mashhad, iran.institute of biotechnology, ferdowsi university of mashhad, mashhad, iran.استاد گروه ژنتیک، دانشکده کشاورزی، دانشگاه فردوسی مشهد، مشهد، ایران.محقق، پژوهشکده فناوری زیستی، دانشگاه فردوسی مشهد، مشهد، ایران.سازمان اصلی تایید شده: دانشگاه فردوسی (ferdowsi university) محمد رضا محمد رضا نصیری، mohammad reza nassiri associate professor, department of genetics,college of agriculture, ferdowsi university of mashhad, mashhad, iran.institute of biotechnology, ferdowsi university of mashhad, mashhad, iran.دانشیار گروه ژنتیک، دانشکده کشاورزی، دانشگاه فردوسی مشهد، مشهد، ایران.محقق، پژوهشکده فناوری زیستی، دانشگاه فردوسی مشهد، مشهد، ایران.سازمان اصلی تایید شده: دانشگاه فردوسی (ferdowsi university) احمد رضا احمد رضا بهرامی، ahmad reza bahrami associate professor, department of molecular cell biology, college of applied sciences, ferdowsi university of mashhad, mashhad, iran.institute of biotechnology, ferdowsi university of mashhad, mashhad, iran.دانشیار گروه زیست شناسی سلولی مولکولی، دانشکده علوم پایه، دانشگاه فردوسی مشهد، مشهد، ایران.محقق، پژوهشکده فناوری زیستی، دانشگاه فردوسی مشهد، مشهد، ایران.سازمان اصلی تایید شده: دانشگاه فردوسی (ferdowsi university) حسام حسام دهقانی، hessam dehghani associate professor, department of physiology, college of veterinary medicine, ferdowsi university of mashhad, mashhad, iran.institute of biotechnology, ferdowsi university of mashhad, mashhad, iran.دانشیار گروه فیزیولوژی، دانشکده دامپزشکی، دانشگاه فرودوسی مشهد، مشهد، ایران.محقق، پژوهشکده فناوری زیستی، دانشگاه فردوسی مشهد، مشهد، ایران.سازمان اصلی تایید شده: دانشگاه فردوسی (ferdowsi university) حسین حسین برقائی، hossein borghaei associate professor, department of medical oncology,fox chase cancer center, philadelphia, pennsylvania, usa.دانشیار گروه انکولوژی پزشکی، مرکز تحقیقات سرطان فاکس چیس، فیلادلفیا، پنسیلوانیا، ایالات متحده آمریکا.سازمان های دیگر: مرکز تحقیقات سرطان فاکس چیس، فیلادلفیا، پنسیلوانیا، ایالات متحده آمریکا. گرگوری گرگوری آدامز

چکیده

مقدمه: scfv ها، فرم هایی از آنتی بادی های نوترکیب می باشند که با استفاده از روش های پیشرفته بیولوژی مولکولی و مهندسی ژنتیک ساخته می شوند. همچنین آنتی ژن her2 هدف مناسبی برای طیف گسترده ای از سرطان ها می باشد. مطالعه حاضر با هدف جداسازی scfv آنتی بادی های اختصاصی انجام شد. روش­کار: به منظور جداسازی قطعات scfv های اختصاصی علیه قسمت خارج سلولی her2 کوت شده در ایمونوتیوب، تکنولوژی نمایش فاژی با استفاده از کتابخانه فاژی صورت گرفت. scfv آنتی بادی های به دست آمده در سویه tg1 از باکتری اشرشیاکلی بیان شدند. محصولات نوترکیب با استفاده از ستون های کروماتوگرافی تمایلی بر علیه his-tag خالص سازی شدند. خصوصیات اتصالی قطعات scfv به دست آمده علیه آنتی ژن her2 با استفاده از آزمون های وسترن بلات، بیوسنسوری و فلوسایتومتری بررسی شدند. یافته­ها: پس از سه مرحله گزینش علیه آنتی ژن her2، سه کلون scfv به دست آمد که نتایج توالی یابی dna اختصاصیت آنها را تأیید نمود. نتایج بررسی کنتیکی بیوسنسور نشان داد که همه scfv آنتی بادی های جدا شده علیه قسمت خارج سلولی آنتی ژن her2 تمایل اتصال با اپی توپ های شناخته شده بر روی سطح آنتی ژن را در دامنه مایکرومولار تا نانومولار دارند. نتایج وسترن بلات و فلوسایتومتری نیز اختصاصیت میل اتصال scfv ها با آنتی ژن her2 را اثبات کردند. نتیجه­گیری: تکنیک نمایش فاژی یک ابزار قدرتمند برای جداسازی scfv آنتی بادی های متصل شونده اختصاصی با گیرنده her2 است که به عنوان آنتی ژن سطحی سرطان پستان شناخته می شود.