ساخت سازه چندمنظوره کلروپلاستی برای ایجاد گیاهان تراریخته تولیدکننده بیوپلیمر زیست تخریب پذیر و مقاوم به شوری، خشکی و سرما

مطهره محسن پور، مسعود توحیدفر

چکیده

چکیده هدف از تحقیق حاضر طراحی و ساخت ناقلین اختصاصی انتقال و بیان کلروپلاستی ژن های تولید کننده بیوپلیمر و ایجاد تحمل به تنش های غیرزنده بود. بدین منظور سه ژن درگیر در مسیر بیوسنتزی پلی هیدروکسی بوتیرات جداسازی شد و صحت جداسازی و عملکردی بودن ژن ها پس از بیان در وکتور بیانی و تولید باکتری نوترکیب تولیدکننده ی phb اثبات گردید. سپس یک کاست بیانی القایی برای این گروه ژنی تحت پیشبر groe و پایانبر thr طراحی و در راستای نشانگر neo ادغام شده با زیرواحد بزرگ atpb تحت پیشبر و پایانبر کلروپلاستی psba و بین توالی های loxp همسانه سازی شد. کاست حاصل در مرکز توالی هدف گیری کننده کلروپلاستی چهارکیلوبازی که از ژنوم پلاستیدی جهت ایجاد امکان الحاق کاست ها به داخل ناحیه بین ژنی trni/trna ژنوم کلروپلاستی از طریق نوترکیبی همولوگ جداسازی شده بود، همسانه سازی گردید و دو ناقل پلاسمیدی نوترکیب تحت عنوان pfnpi(+) و pfnpi(-) ساخته شد. علاوه بر این ژن badh که با رفع سمیّت از بتائین آلدهید علاوه­بر ایجاد مقاومت به شوری، خشکی، سرما به عنوان نشانگر غیرآنتی­بیوتیکی نیز قابل استفاده است، پس از حذف اینترون ها، بهینه سازی کدونی، حذف جایگاه های شناسایی آنزیم های اندونوکلئاز داخلی که تحت پیشبر prrn کلروپلاستی و 5’utr t7gene10 قرار داده شده بود به وکتور کلروپلاستی مذکور اضافه گردید. سازه حاصل تحت عنوان pfbnpi مناسب برای انتقال ژن به باکتری و ژنوم پلاستیدی گیاه بوده و جهت ایجاد گیاهان مقاوم به شوری، خشکی، سرما و تولیدکننده ی بیوپلیمر زیست تخریب پذیر phb مورد استفاده قرار خواهد گرفت.