مقاله

به کارگیری روش سریع و حساس real time pcr در تشخیص ناخالصی های dna در اینترفرون نوترکیب

بابک ممنون، babak mamnoon cellular and molecular research center, faculty of medicine, qazvin university of medical sciences, qazvin, iran.مرکز تحقیقات سلولی و مولکولی، دانشکده پزشکی، دانشگاه علوم پزشکی قزوین، قزوین، ایران. تقی ناصرپور فریور، taghi naserpour farivar cellular and molecular research center, faculty of medicine, qazvin university of medical sciences, qazvin, iran.مرکز تحقیقات سلولی و مولکولی، دانشکده پزشکی، دانشگاه علوم پزشکی قزوین، قزوین، ایران. محسن کریمی ارزنانی، mohsen karimi arzenani molecular medicine department, pasteur institute of iran, tehran, iran.بخش پزشکی مولکولی، انستیتوپاستور ایران، تهران، ایران.

چکیده

زمینه و هدف: اینترفرون ها خانواده ای از سایتوکاین ها هستند که در پاسخ ایمنی به عفونت های ویروسی نقش اساسی دارند. در جریان تولید اینترفرون نوترکیب در میزبان بیولوژیک، قطعاتی از اسیدنوکلئیک میزبان وارد محصول می شود. به علت وجود محدودیت های روش های قبلی در تشخیص این آلودگی ها، هدف از این مطالعه، استفاده از روش مولکولی سریع و حساس real time pcr در این ناخالصی ها می باشد. مواد و روش ها: ابتدا با استخراج dna از میزبان باکتریایی و تهیه رقت های متوالی از آن، واکنش real time pcr به کمک رنگ sybr green i انجام گرفت و منحنی استاندارد رسم گردید. پس از استخراج dna از اینترفرون و انجام واکنش pcr، میزان dna به کمک منحنی استاندارد، تعیین گردید. نتایج: بررسی های انجام شده بر روی چند نمونه اینترفرون، میزان آلودگی dna را حدود 02/0 پیکوگرم در هر دوز محصول نشان داد. همچنین پرایمرهای طراحی شده در واکنش فوق، هیچ گونه واکنشی با یکدیگر و سایر عوامل مداخله کننده نشان ندادند. نتیجه گیری: مطالعه فوق برای اولین بار در ایران بهینه سازی شد و نشان داد که تکنیک real time pcr می تواند به عنوان یک روش کاربردی و بسیار دقیق در مراکز تولیدی جهت تشخیص ناخالصی های dna ناشی از میزبان، در اینترفرون و سایر محصولات دارویی نوترکیب به کار برده شود.

اسناد مشابه