الحاق ژنی زیرواحد b سم کلرا (ctb) با زیرواحد b انتروتوکسین شیگلا دیسانتری تیپ ۱ (stxb) ، همسانه سازی و بیان آن در باکتری e .coli
چکیده
زمینه و هدف: یکی از مهم ترین فاکتورهای بیماری زای اصلی در شیگلا دیسانتری تیپ 1، انتروتوکسین شیگلا یا stxمی باشد، که از یک زیر واحد سمی آنزیماتیک به نام stxa و یک زیر واحد پنتامریک متصل شونده به رسپتور به نام زیر واحد b یا stxb تشکیل شده است. زیر واحد stxb مسئول اتصال زیر واحد سمی به گیرنده سطح سلولی gb3 بوده و در نهایت باعث ورود سم به درون سلول و اثرات آن می شود. زیر واحد b سم کلرا (ctb) به عنوان ادجوانت مخاطی قوی برای واکسیناسیون شناخته شده و همجوشی ژنتیکی آن با هترو آنتی ژن هایی مثل stxb باعث تقویت ایمنی همورال و مخاطی و پاسخ ایمنی علیه آن آنتی ژن می گردد. مواد و روش ها: در این مطالعه ژن های ctb و stxb پس از طراحی پرایمر به وسیله pcr تکثیر و در وکتور pgemهمسانه سازی شدند. ژن stxb به همراه لینکر غیرفورینی به روش برش آنزیمی با ژن ctb در وکتور pgem الحاق شدند و در نهایت قطعه کایمریکctb-stxb در وکتور بیانی pet28a(+) زیر همسانه سازی گردید. پروتئین کایمر تحت القای iptg بهینه سازی و به وسیله تکنیک sds-page و وسترن بلات مورد ارزیابی قرار گرفت. نتایج: قطعه کایمریک ctb-stxbدر وکتور بیانی pet28a(+) به وسیله توالی یابی، pcr و آنالیز آنزیمی تأیید گردید. همچنین پروتئین تولیدی به وسیله sds-page و وسترن بلات مورد تأیید قرار گرفت. نتیجه گیری: پروتئین نوترکیب تولیدی بعد از بررسی ایمنی زایی می تواند به عنوان کاندیدی برای واکسن مخاطی موثر و نوین علیه باکتری شیگلا دیسانتری تیپ 1 در نظر گرفته شود.