بررسی عملکرد سلول‌های شبه عصبی حرکتی مشتق از بافت چربی موش صحرایی با استفاده از رنگ‌آمیزی کلسیم داخل سلولی و ارزیابی ترشح وزیکول‌های سیناپسی

سابقه و هدف: با وجود پیشرفت‌های گسترده در زمینهی کشت سلول‌های بنیادی، هنوز انتخاب بهترین منبع سلولی کارآمد جهت تزریق، قابل تأمل است. علاوه بر این، تا کنون از نشانگر کلسیمی برای بررسی سلول‌های عصبی حرکتی استفاده نشده است. روش‌هایی که تا کنون برای بررسی عملکرد سلولی مورد استفاده قرار گرفته همچون روش‌های الکتروفیزیولوژی (patch-clamp)، علاوه بر سخت بودن و وقت‌گیر بودن، در هر بررسی فقط یک سلول را مورد بررسی قرار می‌دهد. در این تحقیق، نشانگر کلسیمی و ترشح وزیکول‌های سیناپسی در سلول‌های عصبی- حرکتی مشتق از بافت چربی، با استفاده از رنگ‌آمیزی FM1-43 و نشانگر کلسیمی FLUO-2 مورد بررسی قرار گرفته است. مواد و روش‌ها: از موش صحرایی نر بالغ، نژاد wistar با وزن 250-200 گرم استفاده شد. بافت چربی استخراج و سلول‌های بنیادی آن جداگردید. سپس، سلول‌های به دست آمده از لحاظ مارکرهای سلول‌های بنیادی مزانشیمی و مولتی‌پوتنسی، مورد بررسی قرار گرفتند. سلول‌های بنیادی مشتق از بافت چربی تحت تأثیر القا کننده‌های رتینوئیک اسید و SHH، به سلول‌های شبه عصبی حرکتی تمایز یافتند. بعد از تمایز، سلول‌های تولید شده با استفاده از تکنیک‌های ایمنوسیتوشیمی و RT-PCR مورد تأیید قرار گرفتند. در مرحله‌ی نهایی، فانکشنال بودن سلول‌ها با توانایی برقراری ارتباط عصبی-عضلانی، ترشح وزیکول‌های سیناپسی و تبادلات کلسیمی، مورد ارزیابی قرار گرفت که برای این کار از روش‌های هم‌کشتی، رنگ آمیزی FM1-43 و نشانگر کلسیمی FLUO-2 استفاده گردید. یافته‌ها: سلول‌های عصبی- حرکتی مشتق از بافت چربی، تمام مارکرهای مزانشیمی و اختصاصی چربی را بیان می‌کنند و توانایی تمایز به سایر رده‌های سلول‌های مزانشیمی شامل سلول استخوانی، غضروفی و چربی را دارند. این سلول‌ها، بعد از تمایز به سلول عصبی- حرکتی، مارکرهای islet-1، oligo-2 و HB9 را بیان می‌کنند. همچنین، دارای توانایی برقراری ارتباط عصبی- عضلانی، ترشح وزیکول‌های سیناپسی و تبادلات کلسیمی می‌باشند. نتیجه‌گیری: نتایج بدست آمده نشان می‌دهد که سلول‌های عصبی- حرکتی مشتق از بافت چربی، توانایی برقراری ارتباط عصبی- عضلانی، ترشح وزیکول‌های سیناپسی و تبادلات کلسیمی را داشته و یک سلول فانکشنال می‌باشند.