بهینه سازی ترکیب شیمیایی محیط کشت سلولی معین برای تولید ایمونوتوکسین نوترکیب اونتاک

زمینه و اهداف: ایمونوتوکسین یک پروتئین سمی است که به عنوان یک ترکیب نوین برای درمان سرطان پیشنهاد شده است. اونتاک یک ایمونوتوکسین نوترکیب می باشد که از توکسین دیفتری هیبرید شده با اینترلوکین2 تشکیل شده است. در این مطالعه بهینه سازی ترکیب محیط کشت معین بمنظور بیان اونتاک بررسی شده است. مواد و روش کار: در این تحقیق از باکتری سویه BL21(DE3) ترانسفورم شده با پلاسمید نوترکیب PET-IDZ  جهت بیان اونتاک استفاده گردید. ترکیب محیط کشت همچون منبع کربن( گلوکز، ساکارز و گلیسرول)، منبع نیتروژن (کلرید آمونیوم، اوره و سولفات آمونیوم)، غلظت های مختلفIPTG  به عنوان القاگر (0/1  ,5/0  , 1 mM)، زمان القاء و غلظت های مختلف اسید آمینه برای افزایش بیان در کشت فلاسک لرزان بر اساس روش تاگوچی بهینه سازی شده است. غلظت سلول بر اساس روش کدورت سنجی اندازه گیری  شده و میزان بیان پروتئین توسط الکتروفورز روی ژلSDS-PAG   مورد بررسی قرار گرفته است. یافته‌ها: محیط کشت معین اصلاح شده حاوی (g/l)glucose:8 :، K2HPO4:15، KH2PO4: 7.5، Citric acid:2، NH4CL:3، MgSO4.7H2O:1gl به عنوان محیط کشت بهینه تعیین گردید. بهترین زمان القاء توسط IPTG با غلظت 0.1mM، در کدورت نوریOD600nM=2  تعیین شد. با اضافه کردن اسیدهای آمینه (g/l):Valine,0.0502 Pheyalanine,0.0132 Lysine,0.0184 Aspartic acid,0.0160 Serine,0.0251، به محیط کشت، بیان پروتئین اونتاک افزایش یافته است. نتیجه‌گیری: در پژوهش حاضر، آنالیز نتایج به روش تاگوچی مشخص کرد که نوع منبع نیتروژن (کلریدآمونیوم 3 g/l) تاثیر قابل توجهی در رشد سلول داشته است. تولید توده زیستی در محیط کشت بهینه سازی شده نسبت به محیط کشت M9، تقریبا 3  برابر بوده است.