شناسایی گونه‌های کاندیدا جدا شده از نمونه خون بیماران مبتلا به کاندیدمی به روش Seminested PCR

زمینه و هدف: شاهد شیوع عفونت‌های قارچی از جمله کاندیدا و شیوع بیشتر بیماری ایدز، بدخیمی ها و افزایش اختلالات سیستم ایمنی هستیم. این امر زمینه را برای افزایش شیوع کاندیدیازیس سیستمیک و سپتی سمی کاندیدایی خصوصا با گونه‌های غیر آلبیکنس کاندیدا فراهم کرده است. هدف از این مطالعه تعیین هویت گونه‌های کاندیدا جدا شده از نمونه های کشت خون با استفاده از روش Seminested PCR بود. روش بررسی: 2516 نمونه‌ کشت خون در بیمارستان بقیه ا... در سال 1388 از نظر رشد عوامل مخمری بررسی شد. نمونه‌های مثبت از جهت حضور کاندیدا با آزمون های فنوتیپی (مورفولوژی، بررسی رنگ کلنی روی محیط کروم آگار کاندیدا، آزمون لوله زایا و تولید کلامیدوسپور)و ژنوتیپی (Seminested PCR)، بررسی شد. DNAی همه نمونه‌ها به‌طور مستقیم ازکشت خون و با استفاده از کیت DNG-plus استخراج شد. برای PCR مرحله اول از پرایمرهای CTSF و CTSR که قطعه ITS2) Internal Transcribed Spacer2) را تکثیر می کند استفاده شد. محصول مرحله اول به عنوان DNAی الگو برای انجام PCR مرحله دوم با استفاده از پرایمر عقبی مرحله اول(CTSR) و در حضور پرایمرهای اختصاصی گونه به نام های CADET ، CPDET ،CTDET ،CGDET و CDDET استفاده شد. پرایمرهای اختصاصی به ترتیب برای شناسایی گونه‌های کاندیدا آلبیکنس، کاندیدا پاراپسیلوزیس، کاندیدا تروپیکالیس، کاندیدا گلابراتا و کاندیدا دابلینینسیس بود. گونه مخمر با توجه به الگوی باندهای ایجاد شده روی ژل و اندازه آن تشخیص داده شد. یافته ها: از١٤ (0.5%) نمونه کشت خون 16 ایزوله کاندیدا جدا و شناسایی شد. از این تعداد، ٦ ایزوله کاندیدا آلبیکنس، ٤ ایزوله کاندیدا پاراپسیلوزیس، ٤ ایزوله کاندیدا گلابراتا، ٢ ایزوله کاندیدا تروپیکالیس بود. در دو نمونه خون، به‌طور همزمان دو گونه کاندیدا مشاهده و تعیین هویت شد(عفونت مخلوط). کاندیدا دابلینینسیس از هیچ نمونه‌ای جدا نشد. نتیجه گیری: با استفاده از روش مولکولی Seminested PCR ، امکان تشخیص سریع گونه های پاتوژن کاندیدا از نمونه‌های خون با حساسیت و ویژگی بالا، فراهم شد.