استفاده از پروموترهای باکتریایی و باکتریوفاژی برای بیان پری پلاسمی‏‎cdna‎‏ ی ‏‎gm-csf‎‏ انسانی در ‏‎e.coil‎‏

عامل تحریک کننده رده گرانولوسیت -ماکروفاژ ‏‎(gm-csf)‎‏یکی از عوامل رشد خونساز و تنظیم کننده خونسازی می باشد که تولید و فعال سازی گرانولوسیت ها و ماکروفاژها را از سلول های پیش ساز کنترل می نماید.‏‎gm_csf‎‏ کاربردهای دارویی متعددی دارد و به دلیل برخی محدودیت ها در بدست آوردن این پروتئین از منابع طبیعی ، تولید آن در سیستم های بیان ژنی هم ساخت ترجیح داده می شود.به منظور مطالعه بیان پری پلاسمی ‏‎gm_csf‎‏ انسانی در ‏‎‏‎e.coil‎‏ ، ‏‎dna‎‏ ی ‏‎hgm-csf‎‏ به داخل دو پلاسمید بیان کننده که دارای ترادف نشانه ‏‎pelb‎‏بوده و یکی مجهزبه پروموتر ‏‎t7‎‏و دیگری مجهز به پروموتر ‏‎lac‎‏بود وارد گردید.‏‎cdna‎‏ ی ‏‎hgm_csf‎‏ با روش ‏‎pcr‎‏و با استفاده از دو آغازگر اختصاصی که با یکی از جایگاهای برش ‏‎ncol‎‏ یا ‏‎bamhi‎‏در انتها ‏‎3‎‏ آنها طراحی شده بودند تکثیر شد.الگوی پروتئینی به دست آمده از کل سلول سیتوپلاسم و پری پلاسم ( تهیه شده با شوک اسمزی ) باکتریهای نوترکیب ، نشان داد که ‏‎rhgm_csf‎‏ در فضای پری پلاسمی تجمع می یابد که توسط ترادف نشانه ‏‎pelb‎‏ هدایت می شود.نتایج نشان دادند که سطح بیان ‏‎rhgm+csf‎‏تحت کنترل پروموتر ‏‎‏‎t7‎‏ می تواند به حدود 43 درصد کل پروتئین باکتریایی برسد که بسیار بالاتر از سطح بیان ‏‎hgm_csf‎‏ تحت کنترل پروموتر ‏‎lac‎‏ می باشد.