بررسی امکان جداسازی و همسانه سازی cdna ژن منگنز پراکسیداز (mnp) از قارچ خوراکی دکمه ای (agaricus bisporus)، مقدمه ای برای دستورزی ژنتیکی

تولید و پرورش قارچ خوراکی یکی از کاربردهای جاری فن آوری های میکروبی به منظور تبدیل زیستی ضایعات بخش کشاورزی به فرآورده های با ارزش غذایی است. در قارچ خوراکی دکمه ای (agaricus bisporus) آنزیم های مختلفی از ابتدای رشد میسلیومی تا انتهای دوره میوه دهی تجزیه ترکیبات لیگنینی را در محیط کمپوست برعهده دارند. یکی از مهمترین این آنزیم ها، آنزیم منگنز پراکسیداز است که سهم عمده ای در تجزیه ترکیبات لیگنینی دارد. به منظور انجام مطالعات ملکولی بر روی آنزیم منگنز پراکسیداز در قارچ خوراکی دکمه ای سفید نژاد im008 وآماده نمودن زمینه برای افزایش تولید این آنزیم در قارچ خوراکی دکمه ای اقدام به جداسازی و همسانه سازی cdna ژن کدکننده آنزیم منگنز پراکسیداز گردید. برای این منظور استخراج rna از میسلیوم های رشدیافته قارچ خوراکی بر روی محیط کشت مایع عصاره کمپوست انجام شد و cdna آن بوسیله آنزیم رونوشت بردار معکوس ساخته شد. پس از تکثیر قطعه مورد نظر بوسیله واکنش زنجیره ای پلیمراز، قطعه تکثیرشده در ناقل ptz57r/t قرار گرفت و سپس به باکتری e.coli سویه dh5αمنتقل گشت. پس از استخراج پلاسمید از باکتری های تراریخته، پلاسمید استخراج شده مورد هضم آنزیمی قرار گرفت و در مرحله آخر قطعه تکثیر شده تعیین توالی شد. در نتایج بلاست توالی نوکلئوتیدی در مکان¬های بازهای نوکلئوتیدی با شماره های 657 و 850 با توالی ژن mnp1 موجود در بانک اطلاعاتی ncbi تفاوت داشت که به ترتیب سبب تغییر اسید آمینه ایزولوسین به والین و اسید آمینه سرین به آلانین در توالی اسیدآمینه قطعه cdna همسانه شده، می شود.