کلونینگ و توالی یابی ژن کربونیک آنهیدراز از جلبک دونالیلای جداسازی شده از دریاچه های آب شور ایران

چکیده: جلبک تک سلولی دونالیلا بدلیل دارا بودن تحمل فوق العاده نسبت به شرایط نامساعد محیطی، به عنوان موجود مدل برای مطالعه مکانیسمهای مقاومت در گیاهان محسوب می شود. با کاهش چشمگیر میزان co2 محلول در آبهای شور، این جلبک از آنزیم کربونیک آنهیدراز(ca) خاص خود برای جذب منابع کربن بهره می گیرد. آنزیم یاد شده در گیاهان نیز در جذب co2 نقش مهمی ایفاء می کند ولی گمان می رود این آنزیم نسبت به نوع مشابه آن در گیاهان از قدرت وکارائی بیشتری برخوردار باشد و با انتقال آن به گیاهان بتوان میزان جذب co2 ، و به تبع آن راندمان فتوسنتزی را افزایش داد. در این مطالعه پرایمرهای اختصاصی ژن مذکور، بر اساس توالی ثبت شده درncbi طراحی شد. پس از اعمال استرس شوری، استخراج rna و انجام rt-pcr ، این پرایمرها برای تکثیر ژن ca از cdna حاصله استفاده گردید. پس از الکتروفورز محصول pcr برروی ژل آگارز 1%، باند bp2100 شامل کلorf و قسمتی از utr ژن قابل تشخیص بود که پس از خالص سازی بوسیله کیت استخراج از ژل، با روش ta-cloning در داخل پلاسمید ptz57r/t قرار گرفت. ترانسفورماسیون باکتریهایe. coli به روش شوک حرارتی 42ْ به مدت 90ًََ انجام گرفت. سپس پلاسمیدهای نوترکیب بروش لیز قلیائی از این باکتریها استخراج و به عنوان الگو برای انجام pcr با پرایمر های اختصاصی ژن ca استفاده گردید. با استفاده از برش آنزیمی و تفکیک قطعه الحاق شده به اندازه bp2100 از پلاسمید و نیز مشاهده باند bp2100 محصول pcr مرحله قبل، موفقیت کلونینگ تایید شد. پلاسمیدهای نوترکیب برای توالی یابی ارسال گردید. کلمات کلیدی: کلونینگ، دونالیلا، کربونیک آنهیدراز، استرس شوری، فتوسنتز