طراحی کیت سنجش آنتی ژن p24 ویروس hiv با استفاده از انتی بادی منوکلونال انسانی
چکیده
چکیده برای ارزیابی نقش آنتی ژن 24p به عنوان یک شاخص در عفونت ویروس hiv طراحی یک روش سنجش ایمنی ساده و حساس برای تشخیص این آنتی ژن مورد یررسی قرار گرفت. 300 نمونه منفی با کیت نسل سوم آنتی بادی بر علیه hiv مورد آزمایش قرار گرفت وهمچنین30 نمونه مثبت از مرکز تحقیقات ایدز و از بیماران تایید شده با روش ایمونوبلات و nat جمع آوری شد. تمام نمونه ها با کیت طراحی شده با آنتی ژن 24p به روش الیزا مورد آزمایش قرار گرفت.به منظور حذف اثر کمپلکس آنتی ژن – آنتی بادی در سنجش آنتی ژن و جداسازی این کمپلکس از بافر های مختلفی استفاده شد که بهترین پاسخ با استفاده از بافر گلیسین بدست آمد. جهت مقایسه حساسیت و احتصاصیت همزمان از آنتی بادی منوکلونال موشی نیز به عنوان آنتی بادی کوتینگ استفاده شد و با آنتی بادی منوکلونال انسانی مقایسه گردید . از 30 نمونه مثبت در 21 مورد تست آنتی ژن در کیت طراحی شده با آنتی بادی منوکلونال انسانی و 18 مورد در کیت طراحی شده با آنتی بادی منوکلونال موشی قبل از مجاورت با محلول گلیسین مثبت شد . ( حساسیت تشخیصی به ترتیب 70%و60%). پس از مجاور سازی به ترتیب 28 نمونه و 27 مورد مثبت شد . ( حساسیت تشخیصی به ترتیب 93%و90%).در کیت طراحی شده برای تشخیص آنتی ژن 24p حد مرزی بر مبنای جذب نوری نمونه های منفی 0.15 ( معادل 2 پیکوگرم در میلی لیتر آنتی ژن 24p) تعیین شد. اختلاف بین میانگین جذب نوری نمونه های مثبت و منفی در تست آنتی ژن از نظر آماری با 0.005p< قابل توجه است. (جذب نوری 1.6 در مقابل 0.08). حساسیت آنالیتیک سنجش با استفاده از آنتی بادی منوکلونال انسانی و استفاده از آنتی ژن who 1 واحد در میلی لیتر و با آنتی ژن نوترکیب 2 پیکوگرم در میلی لیتر بدست آمد که در استفاده از آنتی بادی منوکلونال موشی این مقدار به ترتیب 4 و8 می باشد بر اساس نتایج خاصل از نمونه های منفی اختصاصیت سنجش 100% بدست آمد.مجاور سازی نمونه سرم های مثبت و نمونه هائی از پانل bbi که تست آنتی ژن و آنتی بادی و pcr مثبت بودند بافر گلیسین 1.5 مولار با 2ph= باعث افزایش حساسیت تشخیصی می شود. (70% در مقابل 93%) . این تست حساسیت و ویژگی بالایی برای تشخیص hiv دارد و در مقایسه با روشهای دیگر تشخیص ، ساده، سریع، دقیق و از نظر اقتصادی مقرون به صرفه می باشد. از این تست در غربالگری نوزادان تولد یافته از مادران hiv مثبت و همچنین تعیین تکلیف در مورد افرادی که تست الیزا نسل چهارم مثبت داشته ولی تست وسترن بلات آن را تائید نکرده است میتوان استفاده کرد . واژگان کلیدی: ، آزمون الیزا ، آنتی ژن 24p ، سنجش ایمنی ، hiv