جداسازی، همسانه سازی و توصیف ملکولی ژن های رمزکننده آنزیم های اندونوکلئاز اختصاصی تک رشته از گیاه جعفری (petroselinum crispum l.) و ساخت سازه بیان پروکاریوتی آنزیم pars ii

تکنیک هضم آنزیمی dna هترودوپلکس، یکی از متداول ترین تکنیک های مورد استفاده در شناسایی جهش های نقطه ای در قطعات ژنومی است. در حال حاضر، آنزیم های cel i و cel ii استخراج شده از گیاه کرفس (apium graveolens l.)، از کاربرد بسیار گسترده ای در این زمینه برخوردارند. این آنزیم ها بصورت عصاره خام آنزیمی و کیت های تجاری در دسترس محققان قرار دارند. در سال های اخیر تحقیقات متعددی در زمینه شناسایی و معرفی آنزیم های اندونوکلئاز جدید با قابلیت هضم اختصاصی نواحی هترودوپلکس در مولکول های dna انجام شده است. شناسایی و توصیف هر آنزیم جدید در این حوزه، علاوه بر ارائه خصوصیات عملکردی و کاربردی بیشتر، اطلاعات جدیدی را در رابطه با مکانیزم عمل و تکامل ژنتیکی این خانواده آنزیمی در اختیار محققان قرار میدهد. در این تحقیق، با توجه به گزارش اخیر مبنی بر فعالیت نوکلئازی قوی تر عصاره آنزیمی گیاه جعفری (petroselinum crispum l.) در مقایسه با گیاه کرفس، توالی های ژنی رمزکننده آنزیم های اندونوکلئاز اختصاصی تک رشته از گیاه جعفری جداسازی گردیده و به نام های pars i و pars ii نامگذاری شدند. همچنین، جهت مقایسه ساختاری و بررسی کمیت و کیفیت فعالیت آنزیمی نوکلئازهای هدف از گیاه جعفری، توالیهای کد کننده آنزیم های cel i و cel ii نیز به عنوان نمونه های کنترل مثبت از گیاه کرفس جداسازی گردیدند. مطالعه خصوصیات فیزیکوشیمیایی، ساختار مولکولی و قرابت ژنتیکی نشان داد که دو آنزیم pars i و pars ii به خانواده نوکلئازهای s1/p1 تعلق داشته و شباهت زیادی به نوکلئازهای cel i و cel ii نشان می دهند. با توجه به مشابهت زیاد توالی ژنی parsii به نوکلئاز اصلی کیتهای تشخیص جهش surveyor® (آنزیم cel ii)، این توالی ژنی به ناقل بیان پروکاریوتی pqe60 به منظور تولید فرم نوترکیب آن در باکتری e. coli منتقل گردید. سازه بیانی ساخته شده، جهت تولید، خالص سازی و بررسی فعالیت آنزیمی پروتئین نوترکیب مورد استفاده قرار خواهد گرفت.