تولید لنتی ویروس های نوترکیب توسط ترانسفکشن موقت سلول های 293t

دیابت نوع 1 یک بیماری خودایمنی است که میلیونها نفر از مردم دنیا به آن مبتلا هستند، دلیل اصلی این بیماری تخریب خودایمن سلول های مولد انسولین در پانکراس است.pdx–1به عنوان یک فاکتور رونویسی هومئودمین، مهمترین فاکتور ژنتیکی در تکوین پانکراس و رونویسی ژن انسولین است. یکی از روش های درمانی موثر برای بیماری دیابت نوع 1، ژن درمانی توسط وکتورهای ویروسی می باشد.هدف از این مطالعه تولید لنتی ویروس نوترکیب حاوی ژن pdx-1، برای ترانسداکشن سلول های بنیادی در راستای ژن درمانی دیابت نوع ? بوده است.قطعه ژنی حاوی توالی pdx-1 وgfp در پلاسمید لنتی ویروسی کلون شده بود. سازه نوترکیب همراه با پلاسمیدهای کد کننده پروتئین های ساختاری و پوششی ویروس با لیپوفکتامین 2000 به درون رده سلولی 293t ترانسفکت شد. سوپ سلولی جمع آوری و ذرات ویروسی توسط اولتراسانتریوفوژ رسوب داده شد، سپس ترانسداکت ویروس های ساخته شده به سلول های 293t انجام شد.ترانسفکشن سلول های 293t با پلاسمید pdx-1 و پلاسمیدهای ساختاری و پوششی ویروس و ارزیابی توسط میکروسکوپ معکوس فلورسنت نشانگر تایید بیان ژن pdx-1 بود. ارزیابی توسط دستگاه فلوسایتومتری تایید کننده تولید لنتی ویروس نوترکیب بود. می توان از لنتی ویرال وکتورها سبب انتقال موثر، کارآمد و پایدار ژن به بسیاری از سلول ها، با هدف ژن درمانی بسیاری از بیماریها از جمله دیابت و سرطان استفاده کرد.