شناسایی ویروسنیوکاسلبااستفادهاز روش haemadsorption- rt-pcr در مدفوع نمونه های کلینیکی مشکوک به نیوکاسل ولوژنیک ویسروتروپیک

بیماری نیوکاسل یکی از مهمترین بیماری های طیور می باشد که همه ی گونه های پرندگان را درگیر می کند. برای تشخیص این بیماری روش های زیادی در دسترس می باشد, علاوه بر جداسازی ویروس به عنوان استاندارد طلایی در تشخیص این بیماری, روش های تشخیص مولکولی نیز تست هایی قابل اطمینان اند. ممکن است بعد از بهبودی از بیماری گاهی تامدتها دفع ویروس رخ دهد. برای ردیابی ویروس در محیط اطراف مرغ های مادر, هچری, مزارع گوشتی و تخم گذار و تعیین حضور ویروس در مدفوع پرندگان زینتی و غیر زینتی موجود در قفس , بناچار نیازمند روشی برای تغلیظ ویروس باهدف جداسازی و تشخیص می باشیم. این مطالعه بگونه ای طراحی شد که با استفاده از رهیافتی جدید بر اساس یک حقیقت بیولوژیکی پذیرفته شده یعنی پدیده ی همادزورپشن ویروس نیوکاسل تغلیظ گردد. برای افزایش حساسیت تست rt-pcr از نمونه های مدفوع و محیطی به عنوان یک تکنیک غیر تهاجمی تصمیم گرفته شد برای تغلیظ ویروس از تست همادزورپشن استفاده گردد. طی سال 2013 میلادی (1391-1392 شمسی) از 50 گله ی گوشتی ارجاعی به بیمارستان تخصصی طیور ماد با علائم بالینی بیماری نیوکاسل , نمونه های بافتی و مدفوع اخذ گردید.نمونه های مغز, طحال و سکال تانسیل 4 جوجه از هر گله بصورت استریل اخذ گردید و مخلوط گشت. همزمان با نمونه های بافتی, نمونه های مدفوع همان جوجه ها جمع آوری و برای هر گله جداگانه مخلوط گردید. استخراج rna و تست rt-pcrمستقیما بر روی نمونه ای مدفوع و بافتی انجام گرفت. همچنین مقداری از نمو.نه های مدفوع نیز در فرایند همادزورپشن وارد گردیدند و مورد استخراج rna و تست rt-pcr قرار گرفتند. در تمام مراحل کار سعی شد از تخریب و آلودگی rna استخراج شده اجتناب شود. بخاطر شیوع گسترده ی نیوکاسل ولوژنیک در منطقه یک جفت پرایمر یونیورسال برپایه ی توالی های بدست آمده از مطالعات قبلی طراحی گردید و در این تست استفاده گردید.محصول rt-pcr با اندازه ی 384 جفت باز در 38 مورد از 50 نمونه ی بافتی تشخیص داده شد. در نمونه های مدفوعی که مستقیما مورد استخراج rna قرار گرفتند 18 مورددر تست rt-pcr مثبت گردیدند. در نهایت در نمونه های مدفوعی که مورد همادزورپشن قرار گرفته بودند 24 مورد از 50 نمونه ی مورد تست مثبت شدند. مجموعا در نمونه های بافتی , مدفوع و نمونه های مدفوع جذب شده باخون به ترتیب 76%, 36% و 68% بیماری نیوکاسل تشخیص داده شد. نتایج نشان داد که در تشخیص مولکولی و شاید جداسازی ویروس از نمونه های محیطی و مدفوع تغلیظ ویروس بوسیله ی فرایند همادزورپشن امکانپذیر است.