همسانه سازی راه انداز اختصاصی gbss سیب زمینی

امروزه تکنولوژی انتقال ژن به یک ابزار بنیادی برای تحقیقات پایه ای در بسیاری از مطالعات گیاهی تبدیل شده است. پایین بودن سطح بیان ژن های انتقالی به گیاهان تراریخته از مهمترین فاکتورهای محدود کننده مهندسی ژنتیک گیاهی است. بنابراین فعالیتهای تنظیمی پروموترها در رونویسی برای بهبود کارائی سیستم تراریخت گیاهی مورد مطالعه قرار می گیرد. به دلیل اهمیت سیب زمینی به عنوان چهارمین غذای مصرفی بعد از گندم، برنج و ذرت این تحقیق روی گیاه مزبور انجام شد. از آنجایی که غده سیب زمینی قسمت خوراکی و مصرفی این گیاه محسوب می شود شناسایی وجداسازی راه انداز اختصاصی آن هدف اصلی این تحقیق می باشد. همچنین از آنجاییکه وجود توالی سیگنال پپتید موجب انتقال پروتئین های نوترکیب به اندام مورد نظر می شود شناسایی و جداسازی این توالی نیز به همراه ناحیه پروموتری هدف گیری شد. در این تحقیق ابتدا اطلاعات مربوط به راه انداز اختصاصی ژن از گیاهان مختلف جمع آوری شده وبا راه اندازهای اختصاصی غده سیب زمینی از نظر توالی نوکلئوتیدی مورد مقایسه قرار گرفت و با استفاده از قسمتهای مشترک و مورد نظر از این راه اندازها آغازگرهایی طراحی شد و برای تولید سفارش داده شدند. برای دسترسی به نواحی مورد نظر پس از استخراجdna از گیاه سیب زمینی، واکنش زنجیره ای پلی مراز با استفاده ازآغازگرهای اختصاصی انجام پذیرفت. بعد از تکثیر قطعات مورد نظر،این قطعات در پلاسمید pgem- t همسانه سازی شدند و باکتری های تراریخت تولید شد و پلاسمیدهای استخراج شده از آنها از طریق آنزیم های برشی مورد تایید قرار گرفتند و نهایتا برای تعیین توالی آنها اقدام شد. توالی های حاصله مجددا مورد بررسی های بیوانفورماتیکی قرار گرفته و نتیجه گیری های لازم یعنی شباهت قطعات همسانه سازی شده با اطلاعات موجود در ncbi تایید شدند.