بررسی اثرات ناک داون ژن p53 بر القای مرگ سلولی در فیبروبلاست نرمال انسانی تیمار شده با نانوکورکومین پلیمری

در حال حاضر کاربرد اکثر داروهای درمان سرطان به علت سمیت زیاد، ناکارآمدی بالا و نیز هزینه¬ی بسیار بالا با محدودیت مواجه می باشد. کورکومین، یک پلی فنل مشتق از گیاه curcuma longa است که دارای خواص ضد توموری بوده و فاقد معایب ذکر شده¬ی داروهای کنونی درمان سرطان است. در غلظت¬های موثر کورکومین علیه سلول های سرطانی، سلول های نرمال آسیب نمی¬بینند. یکی از مهم ترین تفاوت¬های بین سلولهای نرمال و سرطانی عملکرد پروتئین p53 می باشد که می تواند به عنوان یکی از دلایل احتمالی این پدیده مطرح شود. در این تحقیق جهت بررسی فرضیه¬ی فوق با استفاده از sirna،ژن p53 در فیبروبلاست¬های نرمال ناک¬داون شد و اثر نانوکورکومین پلیمری - که جهت ارتقای زیست ماندگاری کورکومین به کار گرفته شده بود – بر القای آپوپتوز و تغییرات بیان ژن¬های p53، p21،bcl-2 ،bax وnf-kb در این سلول¬ها بررسی گردید. در بررسی سمیت سلولی نانوکورکومین پلیمری بر فیبروبلاست¬های نرمال انسانی(hfsf-pi3) و سلول¬های ملانومای انسانی(sk-mel3)، نتایج آزمون mtt نشان داد نانوکورکومین (تا غلظت 20 میکرومولار) بطور انتخابی فقط سلولهای سرطانی را از بین می¬برد و عوارض جانبی بر روی سلول¬های نرمال ندارد. پس از تایید ناک¬داون ژن p53 در فیبروبلاست¬های نرمال توسط تکنیک rt-pcr نیمه کمی، این سلول¬ها با نانوکورکومین(15میکرومولار) تیمار گردیدند و سپس میزان آپوپتوز با استفاده از فلوسایتومتری سنجیده شد. نتایج رنگ¬امیزی annexinv/fitc و pi نشان داد که مهار p53 منجر به افزایش معنی¬دار آپوپتوز القاشده توسط نانوکورکومین می¬گردد. در بررسی تغییرات بیان ژن¬های p21،bcl-2 ،bax وnf-kb ، مشخص گردید که مهار ژنp53 باعث افزایش بیان nf-kb و کاهش بیان ژن p21 شده ولی بر بیان ژن¬هایbcl-2 و bax تغییر معنی¬داری ایجاد نمی¬کند. به دنبال مهار ژنp53 در فیبروبلاست¬های نرمال، تیمار با نانوکورکومین باعث افزایش بیان ژن¬های p53 و p21و کاهش بیان bcl-2 شده ولی اثر معنی-داری بر میزان nf-kb و bax ایجاد نمی¬کند. بطورکلی نتایج ما نشان داد حضور p53 فیبروبلاست¬های نرمال را در برابر نانوکورکومین حفاظت می¬نماید؛ بر همین اساس عملکرد p53 می¬تواند یکی از دلایل مهم اثر متمایز نانوکورکومین بر سلول¬های نرمال و سرطانی باشد. بنابراین، این نتایج پیشنهاد می¬کنند که نانوکورکومین پلیمری دارای ویژگی¬هایی می¬باشد که می¬تواند به عنوان یک عامل موثر در پیشگیری و درمان سرطان به کار رود.