بررسی بیان پروتئین پوششی و تولید آنتی¬بادی علیه پروتئین حرکتی ویروس پیچیدگی زرد برگ گوجه¬فرنگی

گوجه¬فرنگی از لحاظ اقتصادی مهمترین، و از لحاظ میزان تولید دومین محصول کشاورزی ایران است. ویروس پیچیدگی¬زرد برگ گوجه¬فرنگی (tylcv) مهمترین بیمارگر ویروسی این محصول در مناطق گرمسیر، نیمه¬گرمسیر و گلخانه¬ها به شمار می-رود به طوری¬که در برخی مواردتمام محصول را ازبین می¬برد. به منظور تولید آنتی¬بادی و تهیه کیت تشخیص و ردیابی این ویروس مهم، پروتئین پوششی ویروس جهت بررسی بیان در سیستم بیانی pet-e.coli مورد استفاده قرار گرفت. ژن رمز کننده پروتئین پوششی در ناقل بیانی pet26b(+) همسانه¬سازی گردید و پس از توالی¬یابی و اطمینان از صحت همسانه¬سازی جهت بیان به سویه¬های bl21(de3) و(de3) rosetta باکتری e.coli منتقل شد. با وجود تلاش فراوان و القا در غلظت¬های مختلف iptg در دماها و زمان¬های متفاوت، به دلایل نامشخص، میزانی از بیان که قابل استخراج جهت استفاده به عنوان آنتی¬ژن باشد مشاهده نشد. در ادامه تلاش برای تولید آنتی¬بادی علیه ویروس جهت تهیه کیت تشخیصی، پروتئین حرکتی همسانه¬سازی شده ویروس از باکتری استخراج و به خرگوش تزریق شد. آنتی¬سرم تهیه شده، به منظور بررسی کارایی در تشخیص ویروس در آزمون¬های وسترن¬بلات و الایزا مورد استفاده قرار گرفت. در آزمون وسترن¬بلات باند 13 کیلو دالتونی مربوط به پروتئین حرکتی ویروس ردیابی شد. در آزمون الایزا با وجود میزان جذب بیشتر در نمونه¬های گیاهان آلوده، اختلافات مقدار جذب در گیاه سالم و آلوده از لحاظ آماری معنی دار نبود. این نتایج نشان می¬دهند که سیستم معمول pet-e.coli برای بیان پروتئین پوششی این ویروس کارایی ندارد. همچنین آنتی¬سرم تولید شده علیه پروتئین حرکتی، برای آنالیزهای وسترن بلات در گیاهان آلوده مناسب¬تر است و برای استفاده در آزمون الایزا نیاز به استخراج آنتی بادی دارد.