طراحی پلاسمیدهای یوکاریوتی کدکننده آنتی ژن های cfp-10 و esat-6 بر علیه سل گاوی و بررسی ایمنی زایی

تلاش های بیشماری جهت تهیه واکسن موثر علیه بیماری سل گاوی انجام شده است که در این راستا ایمن سازی با پلاسمید نوترکیب حاوی آنتی ژن های هدف، راهکاری امید بخش به شمار می آید. این مطالعه با هدف کلونینگ، تایید بیان و ارزیابی ایمنی زایی پلاسمیدهای یوکاریوتی کد کننده ایمونوژن های هدف در مدل موش balb/c مورد بررسی قرار گرفت. آنتی ژن های 6 esat-و cfp-10 در پلاسمید بیانی یوکاریوتی pcdna3.1(+) کلون شدند. صحت و عملکرد پلاسمیدهای نوترکیب pcdna3.1(+)/esat-6 و pcdna3.1(+)/cfp-10در سطح dna با روش کلونی pcr، نقشه یابی آنزیمی و توالی یابی، در سطح rna باrt-pcr ژن esat-6 و cfp-10 از بافت ماهیچه مورد تزریق و در سطح پروتئین با وسترن بلات تایید شد. سپس موش هایbalb/c به 7 گروه تقسیم شدند و با تیمارهای پلاسمید نوترکیبesat-6 ، cfp-10، ترکیب دو پلاسمید، ppd، pbs، pcdna3.1(+) و گروه بدون تزریق ایمن شدند. بیست روز پس از تزریق، موش ها کشته و طحال و نمونه بافت ماهیچه آنها جدا شد. سپس سوسپانسیون لنفوسیتی تهیه و با ppd گاوی ppdانسانی مواجهه شد و پس از 72 ساعت به منظور سنجش تحریک سلول های لنفوسیت، تست mtt انجام شد. مایع رویی کشت لنفوسیت ها جهت بررسی الگوی ترشحی جمع آوری و با تست الایزا مقادیر ifn-y ، il-10 و il-4 اندازه گیری شد. همچنین سنجش بیان ژن های ifn-y ، il-10 و il-4 به وسیلهreal-time pcr صورت گرفت. آزمایشات الایزا وmtt تایید کرد که پلاسمیدهای نوترکیب کد کنندهesat-6 وcfp-10 توانایی القاء پاسخ ایمنی را در موش ها دارد و می توانند با القاء پاسخ ایمنی کاندید مناسبی برای dna واکسن علیه عفونت سل گاوی باشند.