نام پژوهشگر: امیر صابری

بیان و تخلیص آنتی بادی نوترکیب تک زنجیره s6 (s6.scfv) علیه آنتی ژن سطحی ویروس هپاتیت ب در باکتری اشریشیا کلای
پایان نامه موزه جانورشناسی دانشگاه تهران 1388
  امیر صابری   محمود چمن خواه

در این پروژه تلاش می شود شکلی نوترکیب از آنتی بادی (scfv) برعلیه آنتی ژن سطحی این ویروس در باکتری e. coli بیان و سپس تخلیص شود. هدف از این طرح بیان scfv خاصی موسوم به s6.scfv است که پایداری و اثر بخشی آن در کارهای آزمایشگاهی پیشین به اثبات رسیده است. در این راستا ابتدا تلاش شد با انتقال وکتور pcantab5e حاوی ژن s6.scfv به سلول غیرخنثی کنند? hb2151 شکل محلول پروتئین حاصل از فضای پریپلاسمی باکتری استخراج شود که این کار به دلیل بیان پایین پروتئین عملی نشد. پس از آن تلاش برای تخلیص s6.scfv به صورت نمایش داده شده بر سطح فاژ m13 نیز با موفقیت روبرو نشد. انتقال ژن به وکتور paks75 که وکتور تخصص یافته برای بیان بالا در پریپلاسم است نیز به دلیل نقص در پردازش این پروتئین توسط سیستم های ترشحی سوی? bl21(?e3) موثر واقع نشد. ژن s6.scfv نهایتاً به وکتور بیانی pet19b منتقل شد و منجر به بیان بالایی در بخش پروتئین های نامحلول سیتوپلاسم سوی? bl21(?e3) گردید. پروتئین مورد نظر نهایتاً به کمک روش های موجود محلول سازی و با استفاده از ستون کروماتوگرافی تمایلی ni2+ از سایر پروتئین ها تخلیص شد.