نام پژوهشگر: نینا شریفی آل آقا

انتقال آنتی ژن ایمنی زای هپاتیت c (core 174) به گیاه سیب زمینی از طریق اگروباکتریوم و بررسی بیان آن
پایان نامه وزارت علوم، تحقیقات و فناوری - دانشگاه پیام نور - دانشگاه پیام نور استان تهران - پژوهشکده کشاورزی 1388
  نینا شریفی آل آقا   فرزین روحوند

چکیده مهندسی ژنتیک در گیاه با تولید مواد ارزشمند دارویی، هورمونی، واکسن و انواع پروتئینهای شامل آلبومین، اینترفرون، اریتروپوئیتین، ایمونوگلوبولین، igg، iga و آنتی ژنهای ایمنی زا در حال توسعه و تحقیق می باشد.گیاه تراریخته به منظور تولید واکسن باعث حذف زنجیره سرد در حمل و نقل و تولید راحت می گردد. اخیرا نسل جدیدی از واکسنها بصورت ژن، آنتی ژن و پپتید ایمنی زا ایجاد شده اند که باعث تحریک سیستم ایمنی به کمک سلولهایcd8+ وcd4+ می شوند که بسیار موثر و کم خطر هستند. بیماری هپاتیت c حدود 175 میلیون نفر را در جهان مبتلا کرده و نبود واکسن موثر، شیوع بالای سیروس کبدی، عوارض هپاتیت مزمن و گسترش روزافزون، آن را به یک معضل بهداشتی و جهانی تبدیل کرده است. ویروس هپاتیت c دارای rna تک رشته ای است که پروتئین ساختاری (core) در آن نقش به سزایی در تولید کپسید، فعالیتهایی بیولوژیک و پاتوژنز دارد و در تهیه واکسن به علت ثبات توالی و عدم جهش از دیگر اجزا ویروس مهم تر است. در این تحقیق می خواهیم آنتی ژنهای ایمنی زای core 174 را جهت تولید پروتیئنهای تحریک کننده سیستم ایمنی انسان به گیاه سیب زمینی ترانسفورم کنیم. برای این منظور ژن core174 با کمک پرایمرهای اختصاصی از روی پلاسمید pivex2.4 با تکنیک pcr تکثیر شد. پلاسمیدpbi121 توسط آنزیمهای برشی xba1وsac1 هضم، ژن گزارشگر gus خارج و ژن core174 جایگزین آن شد. وکتور نوترکیب به باکتری e.coli dh5? منتقل و بعد از تایید صحت کاست بیانی پلاسمید نوترکیب (هضم آنزیمی وpcr) به آگروباکتریم ترانسفورم شد. از طریق آلوده کردن گیاه زخمی به آگروباکتریوم حاوی core174 ترانسفورماسیون به گیاه سیب زمینی انجام گرفت. گیاه تراریخت در محیط کشت حاوی آنتی بیوتیک کانامایسین باززایی شد و سپس حضور ژن در ژنوم گیاه تراریخت با آنالیز مولکولی به اثبات رسید. آنالیزهای پروتیئن با روشهای sds-page و برادفورد تولید پروتئین نوترکیب را در گیاه سیب زمینی بیان کردند. نتایج حاصل نشان دادند که پروتیئن core174 در گیاه بیان شده است.