تولید آلبومین سرم انسانی نوترکیب در مخمر متیلوتروف هانسونلا پلی مورفا
چکیده
چکید ه سابقه و هدف آلبومین عمده ترین پروتئین پلاسما می باشد. این پروتئین نه تنها به عنوان حامل بسیاری از ماکروملکول ها در بدن نقش عمده ای ایفا می کند بلکه نقش مهمی در تنظیم فشار اسمزی دارد. امروزه از آلبومین در درمان خونریزی ها و سوختگی های شدید و هم چنین در درمان افراد مبتلا به کمبود آلبومین استفاده می شود. مصرف سالیانه آلبومین در دنیا حدود 450 تن می باشد. به منظور برطرف کردن این نیاز و تولید آلبومین عاری از هرگونه آلودگی از روش های بیوتکنولوژی استفاده گردیده است. در این تحقیق از مخمر هانسونلا پلی مورفا که امروزه در سطح وسیعی به منظور تولید پروتئین های هترولوگ به کار برده می شود، برای آلبومین انسانی نوترکیب استفاده گردیده است. مواد وروش ها مطالعه انجام شده از نوع تجربی (experimental) است. به منظور تولید پروتئین آلبومین نوترکیب و هم چنین بهینه سازی شرایط تولید از سوش rb-11 هانسونلا پلی مورفا به عنوان میزبان استفاده گردید. پلاسمید pfmpt-mfα حاوی cdna آلبومین تحت کنترل پروموتور fmd با استفاده از روش الکتروپوریشن داخل میزبان شد و سپس تحت شرایط مختلف با بررسی پارامترهایی نظیر زمان انکوباسیون، محیط کشت، دما و مهارکننده های پروتئازی بیان آلبومین مورد بررسی قرار گرفت. آلبومین تولید شده با روش هایی هم چون الایزا، hplc و western blot ارزیابی شد. یافته ها درطی این تحقیق چهارعامل مهم دربیان پروتئین آلبومین موردمطالعه قرارگرفت ومشخص گردید که از بین سه محیط derepression ، ynb 1% glycerol ، yp 1% glycerol ، ynb 1% glycerol with buffer ، محیط کشت ynb 1% glycerol with buffer و از بین سه دمای 25، 30 و37 درجه سانتی گراد دمای 37 درجه و از بین سه زمان انکوباسیون، 24، 48 و 72 ساعت، مدت 48 ساعت با حضور آنتی پروتئازها بیشترین میزان تولید آلبومین به دست آمد. نتیجه گیری بالاترین میزان تولید شده تحت شرایط بهینه به دست آمده در مقیاس آزمایشگاهی، mg/l 6/17 را نشان داد. از سوی دیگر با استفاده از این سوش در شرایط نیمه صنعتی، میزان mg/l 478 آلبومین تولید شد و این امر نشان دهنده آن است که می توان تولید پروتئین آلبومین را در شرایط انبوه ادامه داد