انتقال سازه بیانی حاوی ژن های کایمریک igg۱ و fv۱ به رده سلولی تخمدان هامستر در بیان اینفلیکسیماب در سیستم بطری ‏های غلطان

زهره سرابی نژاد، zohreh sarabinejad islamic azad university of damghan branch, damghan, iran.گروه بیوتکنولوژی میکروبی، دانشکده فنی و مهندسی، دانشگاه آزاد اسلامی واحد دامغان، دامغان، ایران. داود نوری اینانلو، davoud nouri inanlou department of research and development, research and production complex, pasteur institute of iran, tehran, iran.گروه ژنتیک مولکولی، مجتمع تولیدی- تحقیقاتی انستیتو پاستور ایران، بخش تحقیق و توسعه، تهران، ایران. شهرام تیموریان، shahram teimourian hemmat highway, iran university, tehran, iran. tel: +98 21 86703243تهران، بزرگراه همت، دانشگاه علوم پزشکی ایران تلفن: 86703243-021

چکیده

زمینه و هدف: اینفلیکسیماب (infliximab) شکلی از آنتی‏بادی‏های نوترکیب کایمریک می‏باشد که هدف مناسبی برای مهار فاکتور نکروز توموری آلفا در بیماری های التهابی است. پژوهش کنونی با هدف ارزیابی بیان آنتی‏بادی منوکلونال اینفلیکسیماب در مقیاس نیمه‏صنعتی در سلول تخمدان هامستر چینی انجام شد. روش بررسی: این مطالعه با هدف تولید نیمه صنعتی، از بهمن 1393 تا مرداد 1394 در مرکز رشد دانشگاه تهران انجام گردید. وکتور حاوی ژن های اینفلیکسیماب، به باکتری e.coli انتقال و وجود ناقل پلاسمیدی حاوی ژن برروی ژل 2% آگارز بررسی شد پلاسمید جداسازی و توسط لیپوفکتامین 2000 (invitrogen, germany) به سلول تخمدان هامستر چینی ترانسفکت شد. سلول ها توسط g-418، دو هفته تیمار و سلول های ترانسفکت شده انتخاب شدند. میزان تولید اینفلیکسیماب در کلون‏های انتخابی پس از 48 ساعت با کیت الایزا igg، مورد سنجش قرار گرفت. کلون با بیان بالا کشت و محصول با ستون افینیتی پروتیین a خالص شد. جهت تایید خلوص، از روش sodium dodecyl sulfate polyacrylamide gel electrophoresis (sds-page) و برای تعیین راندمان تخلیص، از تست الایزا استفاده شد. یافته ها: بررسی ژل آگارز، وکتور حاوی ژن را تایید نمود. ارزیابی غلظت اینفلیکسیماب پس از ترانسفکشن با استفاده از تست الایزا igg در nm 450، بیشترین و کمترین میزان بیان را به ترتیب ng/ml 23 و ng/ml 6 نشان داد. در مرحله تخلیص با ستون افینیتی پروتیین a، پیک مربوط به اینفلیکسیماب، در بازه زمانی 7/0 الی 8/0 دقیقه مشاهده و راندمان تخلیص، 70% محاسبه شد و وجود باند‏های 25 و 50 کیلو دالتونی بر روی ژل پس از تخلیص حضور اینفلیکسیماب را تایید نمود. نتیجه گیری: در پژوهش کنونی بیان اینفلیکسیماب در مقیاس نیمه صنعتی با استفاده از سیستم بطری غلطان با درصد بیان بالا و راندمان تخلیص حدود 70% انجام شد.