مقاله

ساخت و ارزیابی یک سازه ی dna بیان کننده ی پروتئین core ویروس هپاتیت c متصل به آنتی ژن s ویروس هپاتیت b به عنوان یک کاندید واکسن

چکیده

مقدمه: با وجود این که ویروس هپاتیت c (hepatitis c virus یا hcv) یکی از عوامل مهم ایجاد کننده ی بیماری های مزمن کبدی می باشد، هنوز واکسن مناسبی برای آن تهیه نشده است. هدف از این مطالعه، ساخت یک سازه ی بیان کننده ی توالی c‏ore (aa: 1-122) ویروس هپاتیت c متصل به آنتی ژن s ویروس هپاتیت b (hbsag یا hepatitis b surface antigen) و تأیید بیان آن در سلول های یوکاریوتی بود. روش ها: در ابتدا توالی core این ویروس با استفاده از پرایمرهای دارای جایگاه برش آنزیمی bamhi/ecorv از روی وکتور pivex2.4a حاوی این ژن تکثیر شد و در وکتور pcdna3.1 حاوی hbsag خطی شده با آنزیم های مذکور کلون گردید. ارزیابی و تأیید ساختار نوترکیب به وسیله ی برش آنزیم های محدودکننده و در نهایت تعیین توالی صورت گرفت. پلاسمید ساخته شده ی نهایی (pchcore) در رده ی سلولی hek293t ترانسفکت شد و ارزیابی نهایی بیان توسط تست western blot بر روی سلول های hek293t ترانسفکت شده به وسیله ی آنتی بادی پلی کلونال آنتی hbsag موشی انجام شد. یافته ها: توالی ژن (122-1)core ویروس هپاتیت c با موفقیت تکثیر گردید و نتایج ارزیابی، برش آنزیمی و تعیین توالی تأییدکننده ی صحت ساختار نوترکیب pchcore و کلونینگ انجام شده بود. نتیجه ی western blot بیانگر انتقال موفق پلاسمید و بیان ژن هدف در سلول های یوکاریوتی بود. نتیجه گیری: با توجه به ساخت و بیان موفقیت آمیز ساختار hbs-core در سلول های یوکاریوتی و به دلیل احتمال افزایش پاسخ های ایمنی توسط آنتی ژن hbs به صورت فیوژن با پروتئین core (بر اساس تحقیقات قبلی)، سازه ی بیانی حاوی ژن core ویروس هپاتیت c متصل شده به این آنتی ژن، ممکن است باعث القای بیشتر پاسخ های ایمنی علیه پروتئین core شود و بتواند به عنوان واکسن مؤثر به منظور کنترل عفونت hcv به کار رود.

اسناد مشابه