بیان پروتئین m۲ ویروس آنفلوانزای انسانی h۱n۱ در باکتری اشریشیا کلی
چکیده
مقدمه: پروتئین m2 که یک پروتئین هوموتترامر متصل به غشا با پیوند دی سولفیدی می باشد، در میان همه ی ویروس های آنفلوانزای a به طور کامل حفاظت شده است. به همین دلیل هدف مناسبی برای توسعه ی واکسن آنفلوانزا با محافظت وسیع الطیف می باشد. در این مطالعه پروتئین m2 ویروس آنفلوانزای a در سیستم پروکاریوتی بیان شد. روش ها: ژن پروتئین m2 ویروس آنفلوانزا [a/newcaledonia/20/99 (h1n1)] پس از تکثیر به روش pcr (polymerase chain reaction) با استفاده از پرایمرهای اختصاصی و هضم آنزیمی، در وکتور بیانی پروکاریوتی pqe30 جای سازی گردید. پلاسمید نوترکیب pqe30-m2 به سلول مستعد شده e.coli سویه ی m15 منتقل شد و سلول ها در محیط lb مایع واجد آمپی سیلین و کانامایسین بعد از القا با iptg (isopropyl thiogalactoside) به صورت کشت شبانه رشد کردند. بیان پروتئین m2 به وسیله ی الکتروفورز روی ژل آکریل آمید و سپس western blot تأیید شد. یافته ها: نتایج کلونی pcr و هضم آنزیمی و تعیین توالی نشان داد که ژن m2 در وکتور pqe30 به طور صحیح و در قاب خواندنی دنباله ی هیستیدینی کلون شد و تولید پروتئین نوترکیب با استفاده از آنتی بادی اختصاصی ضد پروتئین m2 به روش western blot تأیید گردید. نتیجه گیری: آزمایشات نشان داد که واکسن های بر پایه ی m2 باعث القای ایمنی وسیع الطیف می شوند و می توانند حیوانات را در برابر چالش کشنده تحت تیپ های چند گانه ی ویروس، محافظت نماید. بنابراین پروتئین m2 پس از تخلیص می تواند به عنوان یک کاندید واکسن در نظر گرفته شود و در مطالعات آینده همراه با ادجوانت های مختلف در مدل های حیوانی مورد ارزیابی قرار گیرد.