بیان کاست ژنی blf۱-stxb در باکتری e. coli و بررسی تیترآنتی بادی در موش
چکیده
زمینه و هدف: یکی از راه های تقویت اثر واکسن ها استفاده از ادجوانت ها می باشد. stxb شیگلا دارای نقش ادجوانتی و حاملی بوده و می توان با ممزوج کردن آنتی ژن های کاندیدای واکسن با این ادجوانت به تولید واکسن مناسب پرداخت. blf1نقش مهمی در بیماری زایی و ایجاد عفونت توسط بورخولدریا سودومالئی دارد. هدف این مطالعه، بیان ژن blf1-stxb در باکتری e. coli و بررسی تیتر آنتی بادی آن در موش می باشد. روش کار: ژن صناعی در پلاسمید puc57 از شرکت ندای فن خریداری شد. پلاسمید puc57 حاوی ژن blf1 با جایگاه های آنزیمی bamhi وsali در وکتور بیانی pet28a(+)-stxb زیرهمسانه سازی گردید و به باکتری e. coli سویه bl21(de3) تراریخت (ترانسفورم) شد. بیان کاست ژنی blf1-stxb تحت القایiptg انجام گردید. بعد از تخلیص پروتئین نوترکیب با ستون کروماتوگرافی، چهار نوبت متوالی به موش سوری تزریق شد. یافته ها: در این مطالعه، ژن blf1-stxb کلون شده در وکتور بیانی pet28a(+) به وسیله ی pcr و آنالیز آنزیمی تأیید گردید. همچنین پروتئین نوترکیب تولید شده به وسیله sds-page و لکه گذاری وسترن تایید شد. سپس آنتی بادی تولید شده از سرم موش جداسازی و توسط تست الایزا تایید گردید. نتیجه گیری: با توجه به اینکه پروتئین blf1 توانایی توقف پروتئین سازی و stxb دارای نقش ادجوانتی است. این پروتئین نوترکیب می تواند به عنوان کاندیدای واکسن علیه بورخولدریا سودومالئی و شیگلا دیسانتری مورد استفاده واقع شود.