بررسی تخم تریکوسترنژیلوس های جدا شده از گوسفندان منطقه اصفهان به روش pcr-rflp
چکیده
سابقه و هدف: تریکوسترنژیلوس یکی از انگلهای مشترک انسان و دام است که آلودگی به آن معضلی اقتصادی و بهداشتی قلمداد می گردد. لذا در این مطالعه، تخم کرم گونه ها ی مختلف تریکوستنرنژیلوس جدا شده از مدفوع گوسفندان منطقه اصفهان به روش pcr-rflp و با استفاده از قطعه rdna-its2 مورد بررسی قرار گرفت. مواد و رو ش ها: مطالعه به روش توصیفی بر روی محتویات دستگاه گوارش70 راس گوسفند کشتار شده در کشتارگاههای شهر اصفهان و خوراسگان انجام پذیرفت. تخمهای انگل با روش مستقیم و فلوتاسیون جدا و تخم کرم گونه ها ی تریکوسترنژیلوس براساس شاخصهای ریخت شناسی، شناسایی و جمع آ وری شدند، سپس با روش pcr-rflp مورد بررسی قرار گرفتند. در مطالعه ژنوتیپی dna ژنومی تخم کرمها، استخراج شد و واکنش pcr با پرایمراختصاصی قطعه rdna-its 2 انجام گرفت. محصول pcr هر ایزوله توسط آنزیمهای محدودکننده rsai - hinfi - drai هضم و بر روی ژل آگارزالکتروفورز شد و از آنها عکس تهیه گردید. یافته ها : با توجه به تشابه مرفولوژی تخم گونه ها ی مختلف تریکوسترنژیلوس در زیر میکرسکوپ تشخیص افتراقی آنها امکان پذیر نمی باشد، لذا تشخیص با استفاده از الگوی ژنوتیپی تخم کرمها به روش pcr-rflp انجام پذیرفت . اندازه محصول pcr و dna استخراج شده از تخم کرمها یکسان و حدود 330 نوکلئوتید بود ولی الگوی pcr-rflp گونه ها با یکدیگر متفاوت بود. پس از هضم محصول pcr آن ها با آنزیم rsai دو قطعه حدود 138 و 190 نوکلئوتیدی مشاهده شد. محصول pcr trichostrungylus به دست آمده، با آنزیم drai هضم نشد، اما سه گونه t.vitrinus t.aziei و t.colubrifornoi s هضم شدند و دو قطعه حدود 110 و 215 نوکلئوتیدی در t.axei و t.colubriformis رؤیت گردید که الگویی مشابه همدیگر داشتند. اما t.vitrinus واجد دو قطعه حدود 145 و 185 نوکلئوتیدی بود. از بین چهار گونه فوق تنها محصول pcr تریکوسترنژیلوس colubriformi s با آنزیم hinf i هضم شد و دو قطعه حدود 90 و 238 نوکلئوتیدی روی ژل اگارز مشاهده گردید. نتیجه گیر ی : با توجه به تنوع گونه ها ی انگلی و عدم تشخیص افتراقی آنها به روش میکروسکوپی پیشنهاد می شود با استفاده از پرایمرها و آنزیمهای محدودکننده مختلف، از روش pcr در تشخیص گونه ها ی انگلی مورد نظر استفاده شود.