طراحی سیستم جدید و ایمن سنجش میزان اثرات سایتوپاتیک hiv با استفاده از ویروس های hiv-۱ با قابلیت یک سیکل همانندسازی
چکیده
زمینه و هدف: تحقیقات بسیاری در زمینه یافتن داروهای ضد ویروس hiv در حال انجام میباشند. بررسی بر روی این ترکیبات نیازمند کار با ویروس زنده است که خطرات زیستی فراوانی برای کاربران دارد. لذا در تحقیق حاضر، یک سیستم جدید و ایمن سنجش میزان اثرات سایتوپاتیک hiv با استفاده از ویروسهای hiv-1 با قابلیت یک سیکل همانندسازی (scr) معرفی شده است. روش کار: ویروسهای hiv-1 با قابلیت یک سیکل زندگی، به وسیله ترانسفکشن در سلولهای hek293t تولید شدند. پلاسمیدهای pmd2g ، pspax2 و pmznl4-3 برای تولید ویروس استفاده شدند. سلولهای هدف mt-2 با مقادیر مختلف از ویروس scr hiv-1 آلوده شدند. میزان تشکیل سنسشیوم در میان سلولهای آلوده شده به وسیله شمارش زیر میکروسکوپ نوری بررسی شد. میزان مرگ و میر سلولهای آلوده شده به ویروس به وسیله سنجش میزان تکثیر سلولی با روش xtt بررسی شد. داروهای نویراپین و ایندیناویر به عنوان کنترل مثبت استفاده شدند. یافته ها: با افزایش میزان ویروس شروع کننده آلودگی تا حد 1600ngp24 ، تعداد سنسشیوم در میان سلولهای هدف افزایش نشان داد. با افزایش میزان ویروس به میزان بالاتر تولید سنسشیوم در میان سلولهای mt-2 کاهش یافت. افزایش تعداد سنسشیوم تا سه روز پس از آلودگی مشاهده و سپس کاهش خود به خودی نشان داد. مرگ سلولی در میان سلولهای هدف با رسیدن میزان ویروس شروع کننده به 1600ngp24 به حداکثر خود رسید. میزان توان 50% بازدارندگی اثرات سایتوفیت ( ic50 ) محاسبه شده برای ترکیبهای bms806 و نویراپین بر اساس روش ابداع شده در این مطالعه به ترتیب 30 و 50 نانومولار بوده است. نتیجه گیری: با توجه به نتایج مطالعه امکان انجام بررسی اثرسایتوپاتیک hiv با استفاده از ویروسهای scr hiv وجود دارد. همچنین نتایج بررسی میزان اثر ضد ویروسی دو داروی نویراپین و bms806 نشان دهنده دقت این روش برای سنجش اثر ضد hiv-1 ترکیبات مختلف میباشد. همانندسازی یک دورهای scr hiv باعث افزایش امنیت زیستی روش ابداعی در این مطالعه نسبت به استفاده از ویروس نامیرا میباشد.