تولید آنتی بادی منوکلونال در موش علیه مورفین بدون واکنش متقاطع با هرویین
چکیده
مقدمه: سنجش های ایمنی برای تشخیص و تعیین مقدار اپیوییدها در خون و سایر مایعات بیولوژیک بر مبنای آنتی بادی ها می باشد. در این مطالعه تولید آنتی بادی منوکلونال علیه مورفین مدنظر بود. روش بررسی: تولید آنتی بادی منوکلونال علیه مورفین در موش طبق روش استاندارد هیبریدوما انجام گرفت. بدین منظور، پنج سر موش balb/c ماده 6 تا 8 هفته ای با مشتق 6- مورفین همی سوکسینات کونژوگه با آلبومین سرم گاوی کاتیونیزه شده ایمن سازی گردیدند. سلول های لنفوسیت b طحال موش های ایمن شده با سلول های میلومایی موشی (sp2/0) با استفاده از پلی اتیلن گلیکول با یکدیگر ادغام شدند. سلول های هیبریدوما با رقیق سازی حد تک کلون و تکثیر داده شدند. کلاس و زیر کلاس آنتی بادی منوکلونال توسط کیت ایزواستریپ شرکت roche تعیین شد. به منظور تخلیص آنتی بادی از افینیتی کروماتوگرافی پروتئینg استفاده گردید. افینیتی آنتی بادی به روش beatty سنجیده شد. واکنش های متقاطع آنتی بادی تولیدی با مولکول های شبه مورفین تعیین گردید. نتایج: از بین3 کلون ترشح کننده آنتی بادی علیه مورفینbsa- بعد از سه بار رقیق سازی یک کلون مترشحه پایدار به دست آمد. کلاس آنتی بادی حاصل از نوع igg2b و زنجیره سبک آن از نوع لامبدا (λ) بود. افینیتی آنتی بادی حاصل برای مورفین برابر با m-1109 × 8/2 بود. تیتر آنتی بادی در محیط رویی سول های هیبریدما 1:400 بود. این آنتی بادی هیچ واکنش متقاطعی با هرویین، نالوکسان، نالتروکسان و پاپاورین نشان نداد. نتیجه گیری: آنتی بادی منوکلونال تولیدی علیه مورفین از افینیتی و ویژگی مناسبی برخوردار بود و با هرویین واکنش متقاطعی نشان نداد. بنابراین این آنتی بادی در طراحی روش های سنجش ایمنی برای تشخیص مورفین در مایعات بیولوژیک می تواند مورد استفاده قرار گیرد.