بهینه سازی بیان و تخلیص پروتئین نوترکیب لیپوپروتئین مرتبط با پپتیدوگلیکان (pal) باکتری لژیونلا پنوموفیلا

ابوالفضل قلی پور، abolfazl gholipour 1medical plants research center and microbiology dept, shahrekord university of medical sciences, shahrekord, i.r.iran;مرکز تحقیقات گیاهان دارویی و گروه میکروبیولوژی، دانشگاه علوم پزشکی شهرکرد، شهرکرد، ایران سید مجتبی موسویان، seyedmojtaba moosavian 2infectious diseases and tropical research center and microbiology dept, joundishapour university of medical sciences, ahvaz, i.r.iran2مرکز تحقیقات عفونی گرمسیری و گروه میکروبیولوژی، دانشگاه علوم پزشکی جندی شاپور، اهواز، ایران حمید گله داری، hamid galehdari 3genetics dept, shahid chamran university, ahvaz, i.r.iran;گروه ژنتیک، دانشگاه شهید چمران، اهواز، ایران؛ 4گروه فیزیولوژی، دانشگاه علوم پزشکی جندی شاپور، اهواز، ایران منوچهر مکوندی، manoochehr makvandi 2infectious diseases and tropical research center and microbiology dept, joundishapour university of medical sciences, ahvaz, i.r.iran2مرکز تحقیقات عفونی گرمسیری و گروه میکروبیولوژی، دانشگاه علوم پزشکی جندی شاپور، اهواز، ایران سید علی مرد، seyedali mard 4physiology dept., joundishapour university of medical sciences, ahvaz, i.r.iran4گروه فیزیولوژی، دانشگاه علوم پزشکی جندی شاپور، اهواز، ایران حمید رجبی معماری، hamid rajabimemari 5agronomy and plant breeding dept., shahid chamran university, ahvaz, i.r.iran;گروه زراعت و اصلاح نباتات، دانشگاه شهید چمران، اهواز، ایران رضا ایمانی

چکیده

زمینه و هدف: اکثر تست های موجود برای تشخیص پنومونی لژیونلایی، با مشکلات زیادی از جمله حساسیت و ویژگی پائین و عدم توانایی در فراهم نمودن نتیجه در یک زمان کلینیکی مناسب مواجه هستند. از آنجایی که لیپوپروتئین مرتبط با پپتیدوگلیکان ( pal ) لژیونلا پنوموفیلا در درون ادرار ترشح شده و به عنوان یک آنتی ژن در تمام سویه های آن وجود دارد. لذا برای تشخیص بیماری لژیونر از طریق ادرار مورد توجه قرار گرفته است. هدف از این مطالعه بهینه سازی بیان و تخلیص پروتئین نوترکیب pal باکتری لژیونلا پنوموفیلا بوده است. روش بررسی: در این مطالعه تجربی آزمایشگاهی بیان پروتئین pal با تغییر در پارامترهای دانسیته سلولی، مدت زمان القاء، دمای رشد، غلظت ایزوپروپیل بتا دی تیوگالاکتوپیرانوزید ( iptg ) و نوع محیط کشت مورد بررسی قرار گرفت. پس از کلونینگ، عصاره پری پلاسمی تهیه و پروتئین نوترکیب pal با استفاده از ستون رزین نیکل نیتروتری استیک اسید ( nta ) تخلیص گردید. در نهایت پروتئین نوترکیب pal با آزمایش وسترن بلاتینگ بررسی شد. یافته ها: با استفاده از محیط کشت terrific broth ، شروع القاء در جذب نوری 6/0 (طول موج 600 نانومتر)، غلظت یک میلی مولار ماده القاء کننده iptg ، دمای رشد 25 درجه سانتیگراد و مدت زمان 15 ساعت پس از القاء، بهترین بیان پروتئین pal بدست آمد. پروتئین پری پلاسمی نوترکیب pal با استفاده از ستون رزین nta با خلوص بیش از 80% تخلیص گردید. نتایج آزمایش وسترن بلاتینگ نیز نشان داد که پروتئین نوترکیب pal تخلیص شده به طور اختصاصی با آنتی بادی anti-his6-peroxidase شناسایی گردید. نتیجه گیری: با تخلیص پروتئین pal به میزان بیش از 80% می توان به منظور بررسی پتانسیل آن در تشخیص بیماری لژیونر و تهیه کیت تشخیصی بر اساس الایزا از آن استفاده نمود.