تشخیص سریع مایکوباکتریوم های مقاوم به ریفامپین با استفاده از real-time pcr

بهناز طاهری، behnaz taheri department of biotechnology and microbiology, faculty of medicine, arak university of medical sciences, arak, iranگروه بیوتکنولوژی و میکروبیولوژی، دانشگاه علوم پزشکی اراک، اراک، ایران سیامک سمیعی، siyamak samiee food and drug laboratory research center, ministry of health and medical education, tehran, iranمرکز تحقیقات آزمایشگاهی غذا و دارو، وزارت بهداشت و درمان و آموزش پزشکی، تهران، ایرانسازمان اصلی تایید شده: دانشگاه علوم پزشکی اراک (arak university of medical sciences) مهدی پریان، mehdi paryan biotechnology research center, pasteur institute of iran, tehran, iranگروه بیوتکنولوژی پزشکی، انستیتو پاستور ایران، تهران، ایرانسازمان اصلی تایید شده: وزارت بهداشت درمان و آموزش پزشکی (ministry of health and medical education) احسان اله غزنوی راد، ehsanollah ghaznavi-rad department of microbiology, arak university of medical sciences, arak, iranگروه میکروب شناسی، دانشگاه علوم پزشکی اراک، اراک، ایرانسازمان اصلی تایید شده: انستیتو پاستور ایران (pasteur institute of iran)

چکیده

زمینه و هدف: مقاومت دارویی در مایکو باکتریوم توبرکلوزیس یکی از نگرانی‎های جدی می‎باشد که محققان و پزشکان با آن مواجه هستد. شناسایی سریع توبرکلوزیس‎های مقاوم به منظور شروع بی‎درنگ و مناسب درمان با داروهای خط دوم ضروری می‎باشد. این امر منجر به افزایش بازده درمان و جلوگیری موثر از انتقال وگسترش این بیماری مسری خواهد شد. هدف از این مطالعه طراحی روشی مبتنی بر real-time pcr جهت تشخیص موتاسیون‎های موجود در ناحیه rrdr ژن rpob که منجر به مقاومت به ریفامپین در مایکوباکتریوم توبرکلوزیس می‎شوند. مواد و روش‎ها: در این مطالعه تجربی پرایمر و پروپ توسط نرم افزارهای اختصاصی برای ناحیه rrdr ژن rpob به منظور شناسایی جهش طراحی شد. برای ارزیابی حساسیت و ویژگی کلینیکی واکنش از نمونه‎های بالینی استفاده شد که پیش از این مقاومت و حساسیت آنها به وسیله تست حساسیت دارویی تناسبی تعیین شده بود. یافته‎ها: با استفاده از 40 نمونه بالینی(20 سویه حساس و 20 سویه مقاوم) حساسیت پروب استفاده شده برای تشخیص موتاسیون در کدون 526 و 531 معادل100 درصد در نظر گرفته شد. پرایمر و پروب‎های طراحی شده تنها به ناحیه اختصاصی rrdr ژن rpob مایکوباکتریوم توبرکلوزیس متصل می‎گردند و مطالعات بیوانفورماتیکی هیچ گونه واکنش متقاطعی با ژنوم سایر میکرو ارگانیسم‎ها و انسان نشان ندادند. ویژگی بالینی روش راه اندازی شده به طور تجربی و با بررسی 25 نمونه منفی مورد آزمایش قرار گرفت و معادل 100 درصد در نظر گرفته شد. نتیجه گیری: روش real-time pcr راه اندازی شده به علت سرعت و حساسیت بالا می‎تواند به عنوان ابزاری مفید وکارا در تشخیص سریع مایکوباکتریوم‎های مقاوم به ریفامپین در نظر گرفته شود.