مقاله

شناسایی گونه های مختلف آیمریاهای جدا شده از طیور ایران به وسیله واکنش زنجیر پلیمراز (pcr)

چکیده

هدف : شناسایی و تفکیک گونه های مختلف آیمریاهای طیور ایران با استفاده از روش (pcr). طرح : استفاده از نرم افزار آنالیز جمعیتهای ژنتیکی جهت تعیین ضریب شباهت. حیوانات: واحدهای مرغداری مرغ مادر، از 5 منطقه آب و هوایی ایران که واکسن کوکسیدیوز استفاده نکرده بودند، جهت نمونه برداری انتخاب و تعداد 114 نمونه بستر به طور تصادفی از این مرغداریها تهیه شد. روش اواوسیست های موجود در نمونه ها به روش شناورسازی جدا و dna آنها به وسیله قتل کلروفروم و با استفاده از پروتئیناز k استخراج شد. برای شناساییو تفکیک گونه های مختلف آیمریا از چهار جفت پرایمر اختصاصی طراحی شده از سکانس ناحیه dna,internal transcribed spacer-1(its1) ریبوزومی آیمریاآسروولینا، آیمریا برونتی، آیمریانکاتریکس و آیمریاتنلا و یک جفت پرایمر یونیورسال bsef-bser که ناحیه its1 گونه های مختلف آیمریاها را تکثیر می کند استفاده شد. نتایج : dna ژنوم اواوسیست های جدا شده از مدفوع طیور آلوده با پرایمرهای اختصاصی توسط واکنش زنجیر پلیمراز تکثیر و بر حسب نوع گونه آیمریا یک قطعه dna در اندازه 320 جفت باز (آیمریا آسروولینا)، 311 جفت باز (آیمریابرونتی)، 384 جفت باز (آیمریانکاتریکس ) و 287 جفت باز (آیمریاتنلا) بر روی ژل آگارز حاوی اتیدیوم بروماید مشاهده شد. برای شناسایی گونه ها در نمونه هایی که آلودگی مخلوط داشتند و گونه های خالصی که برای آنها جفت پرایمر اختصاصی وجود نداشت از جفت پرایمر یونیورسال استفاده شد. در این بررسی 5 گونه آیمریا ماکزیما، آیمریابرونتی، آیمریاتنلا، آیمریاآسروولینا و آیمریامیتیس شناسایی شدند که شناسایی و گزارش آیمریامیتیس و آیمریابرونتی برای اولین بار در ایران در این بررسی صورت گرفته است. نتیجه گیری : در پایان با توجه به نتایج به دست آمده جفت پرایمرها معرفی شده کاملا اختصاصی عمل نمودند و جفت پرایمر یونیور سال نیز توانست 5 گونه ایمریا را در نمونه های آلوده و همچنین نمونه هایی که برای آنها جفت پرایمر اختصاصیز وجود نداشت را از یکدیگر تفکیک و مورد شناسایی قرار دهد. بنابراین تشخیص گونه های آیمریا با روش (pcr) یک روش بسیار سریع، دقیق، آسان و ارزان است و نیاز به خالص سازش و تکثیر ندارد پیشنهاد می گردد این روش به عنوان یک روش روزمره در آزمایشگاه های کشور که امکانات لازم را دارند مورد استفاده قرار گیرد.

اسناد مشابه