شناسایی اورنیتوباکتریوم رینو تراکئال به روش واکنش زنجیره ای پلیمراز (pcr)
چکیده
چکیده اورنیتوباکتریوم رینوتراکئال ( ort) به صورت یک عامل بیماریزای باکتریایی نوظهور در گله های ماکیان و بوقلمون شناخته شده است. تشخیص عفونت ort با برخی مشکلات در کشت و شناسایی قطعی باکتری با کمک خواص بیوشیمیایی آن مواجه بوده است. دسترسی به یک روش شناسایی قطعی و قابل اتکا که بتواند در پژوهشهای آزمایشگاهی متداول بکار آید، حائز اهمیت می باشد. هدف از این مطالعه شناسایی ort به روش زنجیره ای پلیمراز ( pcr)، درمقایسه با روش کشت بود. به منظور راه اندازی این pcr از پرایمرهای 1s-f16or و 1s-r16or، باکتریهای شناخته شده ort و 7 گونه باکتری دیگر، نظیر هموفیلوس پاراگالیناروم و پاستورلا مولتوسیدا، به ترتیب به عنوان کنترلهای مثبت و منفی استفاده شد. روش استخراج فنل و کلروفرم برای تهیه dna از نمونه ها به کار رفت. 60 نمونه تجمیع شده بدست آمده از نای و سینوس زیر چشمی 30 گله جوجه گوشتی کشتار شده در یکی از کشتارگاههای منطقه قزوین، از نظر آلودگی به ort با هر دو روش کشت و pcr بررسی شدند. یک باند 784 جفت بازی در 5 نمونه کنترل مثبت ort، 19 مورد از 60 نمونه اولیه، شامل 11 نمونه هموژنیزه نای و 8 نمونه سواب سینوس زیر چشمی و در تمامی17 نمونه باکتریهای جدا شده و مشکوک به ort دیده شد؛ ولی در 7 مورد باکتری کنترل منفی مشاهده نگردید. در یک مورد از 41 نمونه اولیه منفی شده در pcr، باکتری ort با کمک کشت جداسازی گردید و این باکتری تکثیر شده در آزمایش مجدد pcr مورد شناسایی قرار گرفت. پانزده مورد از 30 گله ( 50درصد) در آزمایش pcr مثبت تشخیص داده شدند و تنها یک مورد از آنها در کشت باکتریایی منفی شد. بر اساس نتایج بدست آمده؛ pcr بکار رفته در این مطالعه می تواند برای شناسایی مطمئن و سریع ort در نمونه های مشکوک به عفونت ort استفاده شود، اما بهتر است که به منظور به حداکثر رساندن تشخیص عفونت، با روش کشت توام باشد