تولید پروتئین دوگانه espa- tir از باکتری اشریشیا کلی o157:h7 در گیاه توتون (nicotiana tobbacum)
چکیده
باکتری e.coli o157:h7 یک پاتوژن مهم انسان و حیوان است که در انسان موجب بروز اسهال خونریزی دهنده و سندرم اورمی همولتیک (hus) میشود. اتصال به سلولهای میزبان اولین گام در تثبیت این باکتری است که به واسطه سیستم ترشحی نوع iii (t3ss) و از طریق میانکش بین پروتئینهای ترشحی صورت میگیرد. در این میان espa به عنوان جزء اصلی تشکیل دهنده سیستم ترشحی است و ارتباط تنگاتنگی با اتصال اولیه باکتری به سلول میزبان و تشکیل بیوفیلم باکتریایی دارد. espa به سبب ساختار خود و قرارگرفتن در غشاء باکتری، یک ایمنیزای قوی میباشد. tirنیز پروتئینی است که پس از بیان در باکتری و از طریق t3ss به سلول میزبان منتقل و در غشاء آن مستقر میشود و نقش مهمی در اتصال باکتری به میزبان دارد. هدف از این تحقیق ساخت سازه ژنی که دارای فاکتورهای فوق الذکر (espa-tir) بوده و انتقال آن به درون گیاه هدف می باشد. در راستای ساخت واکسن خوراکی کارا بر علیه باکتری اشریشیا کلی o157:h7. پس از بررسیهای بیوانفورماتیکی سازه ژنی دو قسمتی و espa-tir توسط رابط جداکننده پپتیدی به یکدیگر متصل و ژن آن ها به طور مصنوعی ساخته شد. پس از بهینه سازی کدونها براساس گیاه تنباکو، تحت کنترل پروموتر camv35s در ناقل بیانی گیاه کلون گردید. سپس تراریختی و باززایی گیاه تنباکو با آن انجام گرفت. آنالیزهای انجام شده مشخص کرد که ژن های مربوطه در گیاه موردنظر وارد و بیان میگردد