طراحی و ساخت پروتئین نوترکیب و dna واکسن fimh اشریشیاکلی یوروپاتوژن و ارزیابی ایمنی زایی آنها در موش آزمایشگاهی
Abstract
عفونت دستگاه ادراری یکی از شایعترین عفونت¬ها در انسان محسوب می¬شود و سویه¬های اشریشیا کلی یوروپاتوژن شایعترین عامل آن هستند. این سویه¬ها در مثانه کلونیزه شده و باعث سیستیت می¬شوند اما می¬توانند به سمت کلیه¬ها حرکت کنند و عامل پیلونفریت شوند. از آنجائیکه پروتئین fimh در کلونیزاسیون سویه¬های upec و ایجاد عفونت نقش بسیار مهمی دارد تهیه واکسن حاوی این ادهسین¬ مورد توجه است. در تحقیق حاضر، ادهسین fimh به عنوان کاندید ایمونوژن انتخاب گردید. از اشریشیا کلی سویه 35218 ، dna ژنومی استخراج گردید و ژن fimh با pcr تکثیر شد. محصول pcr در وکتور pbluescript sk کلون شده و با توالی¬یابی تایید گردید. سپس دومین لکتین ژن fimh با pcr تکثیر شده و در وکتورهای بیانی pet23a و pcdna3 وارد شد. کلون¬های بدست آمدة pet/fimh و pcdna/fimh با توالی¬یابی تایید شده و در اشریشیا کلی سویة (de3) origami و ردة سلولی cos7 وارد شدند. بیان پروتئین نوترکیب fimh در باکتری با western blot تایید گردیده و با کروماتوگرافی افینیتی تخلیص شد. همچنین بیان کاست pcdna/fimh در ردة سلولی cos7 با rt-pcr تایید شد. به پنج گروه موش بترتیب پروتئین fimh ، pcdna3 ، ادجوانت ، pbs و pcdna/fimh در دو مرحله تزریق شد و یک هفته پس از تزریق دوم خونگیری شده و در سرم آنها تیترigg و زیرکلاس¬های igg1 و igg2a اندازه¬گیری شد. همچنین تیتر il.4 و ifn-γ اندازه¬گیری شدند. موش¬های ایمن¬شده با تزریق یکصد میلیون اشریشیا کلی 35218 در مثانه مورد چالش قرار گرفتند. دو روز پس از تزریق باکتری، مثانه خارج شده و کشت داده شد. میزان ایمن¬شدن در گروه دریافت¬کننده پروتئین بیشتر از گروه دریافت¬کننده dna واکسن بود، علیرغم آنکه گروه اخیر پاسخ ایمنی سلولی بالاتری داشته است. بعبارتی پاسخ ایمنی هومورال در پیشگیری از کلونیزاسیون باکتری در مثانه موثر بوده و پاسخ ایمنی سلولی در پیشگیری از عود عفونت می¬تواند موثر باشد.