جداسازی ژن رمزکننده‏ی پمپh+-atpase غشای پلاسمایی از گیاه هالوفیت aeluropus littoralis

چکیده با هم ردیف سازی ژن های رمز کننده ی h+-atpase در گیاهان مختلف نواحی حفاظت شده شناسائی و برای آن ها آغازگرهای دجنره به منظور تکثیر ژن مذکور از گیاهان مورد نظر طراحی گردید. با استفاده از آغازگرهای طراحی شده قطعاتی از ژنوم گیاه aeluropus littoralis طی واکنش زنجیره‏ای پلیمراز تکثیر و توالی یابی گردید. بررسی ها نشان دادند که این توالی‏ها مربوط به ژن h+-atpase غشای پلاسمایی هستند. آران آ از گیاهان aeluropus littoralis و aeluropus lagopoides استخراج و از روی آن cdnas تهیه شد. سپس با طراحی آغازگرهای اختصاصی برای نواحی رمز شونده، قطعاتی با طول های مختلف از cdnas تهیه شده تکثیر گردید. با استفاده از تکنیک تکثیر سریع cdnas، طول کامل 3541 جفت بازی یکی از ایزوفرم ها به دست آمد. این قطعه شامل open reading frame (orf) به طول 2856 جفت باز می باشد که دارای یک ناحیه ی بالا دستی دارای 284 جفت باز و یک ناحیه ی پایین دستی دارای 401 جفت باز است. توالی پروتیینی پیش بینی شده با استفاده از پایگاه اطلاعاتی expasy برای جستجوی موتیف-های شناخته شده جهت بررسی ساختمان و عملکرد پروتیین حاصل استفاده شد. بر اساس شاخص کیت و دولیت تعداد دومین‏های درون غشایی پروتیین رمز شده توسط این ژن 10 عدد مشخص گردید. با انجام سادرن بلاتینگ تعداد 10 تا 11 نسخه برای ژن مورد نظر مشخص شد. همچنین با تجزیه و تحلیل توالی قطعات ژنی تکثیر شده در دو گونه، مشابهت آن در هر دو گیاه و نیز با سایر گیاهان مورد بررسی قرار گرفت. نتایج نشان دادند که توالی ژنی در دو گیاه تا حد زیادی به هم شبیه هستند.