تولید پروتئین کایمریک intimin : espa از e. colio157h7 در گیاه تنباکوی تراریخته
چکیده
اشریشیاکلی سویه o157:h7 یکی از مهمترین پاتوژن های غذایی تولید کننده بیماری کولیت خونریزی دهنده و ادرار خونی در انسان می باشد. دام های اهلی اصلی ترین مخزن این باکتری بوده و بکارگیری واکسن بر علیه آن یکی از مهمترین را ههای پیشگیری این باکتری می باشد. پروتئین های intimin و espa دو فاکتورمهم بیماریزایی و کلونیزاسیون این باکتری دراپیتلیوم روده میزبان به حساب می آیند که توسط ژن های موجود در جزیره پاتوژنسیته lee تولید می شوند. پروتئین espa بخش اصلی از پروتئین هایی است که در ساخت کانال ارتباطی در سیستم ترشحی نوع iii نقش داشته و مانند یک رابط سبب انتقال پروتئین tir به سلول میزبان می شود ( در اینجا انسان) و در نهایت پروتئین intimin با اتصال به tir منجر به اتصال باکتری به سلول میزبان می شود. این اتصال باعث ایجاد ضایعه تخریب دیواره سلول یا ae میزبان می گردد فرضیه انجام تحقیق بر این اصل است که تولید عوامل بیماریزای espa;intimin به صورت کایمریک به عنوان کاندیدای واکسن خوراکی می تواند کلونیزاسیون ecolio157h7 را در حیوان مدل کاهش دهد. برای این منظور یک سازه ژنی حاوی قسمت های ایمونوژن espa (e) و eae (i) با استفاده از یک رابط پپتیدی با ساختار ?- هلیکس به یکدیگر متصل و ژن آن به طور مصنوعی ساخته شد. این ژن مصنوعی براساس کدون های (رمزهای) میزبان گیاه بهینه سازی و سپس با استفاده از پیش بر camv35s جهت بیان درون گیاه تنباکو درون ناقل بیانی گیاه کلون شد. ساختار ایجاد شده به کمک آگروباکتری به درون گیاه انتقال داده شد. بر اساس آنالیز های انجام شده توسط الالیزای کمی مشخص شد که پروتئین کایمریک درون برگ گیاه تنباکو به طور متوسط 3/0 درصد از پروتئین محلول گیاه (tsp) را تشکیل می دهد. کاربرد گیاهان ترانسژن حاوی این ایمونوژن دو گانه می تواند ابزار مناسبی برای محافظت در برابر حضور و بیماریزایی باکتری e. coli o157:h7 در مدل حیوانی باشد. ?