بررسی کارائی سیستم phic31 اینتگراز جهت انتقال هدفمند ژن در روش smgt

ساخت حیوانات تراریخته با استفاده از اسپرم به عنوان حامل dna خارجی (smgt) یکی از روش های شناخته شده در بحث حیوانات تراریخته محسوب می شود. امروزه از تزریق درون سیتوپلاسمی اسپرم (icsi) در این روش، استفاده های قابل توجهی به عمل می آید. با توجه به سادگی و راندمان بالا در ساخت حیوانات تراریخته در روش smgt الحاق تصادفی ژن در این روش یکی از ایرادهای اساسی مرتبط با این تکنیک محسوب می شود. در این مطالعه سعی گردید کارائی سیستم phic31 integrase به عنوان یک روش انتقال هدفمند ژن، در بهبود روش smgt مورد ارزیابی قرار گیرد. بدین منظور ابتدا روش icsi با استفاده از اعمال پیش تیمار هپارین-گلوتاتیون بر روی اسپرم بهینه سازی گردید. در مرحله بعد پروتئین و mrna اینتگراز در شرایط آزمایشگاهی تولید و عملکرد محصولات تولید شده مورد ارزیابی قرار گرفت. تعداد 7 جایگاه قابل شناسائی توسط سیستم phic31 integrase بر روی ژنوم گاو در نظر گرفته شد. با طراحی پرایمرهای مناسب و واکنش pcr صحت این جایگاه ها در فیبروبلاست های تراریخته شده گاوی به وسیله سیستم phic31 integrase ، مورد بررسی قرار گرفت. راندمان سیستم phic31 integrase با استفاده از تزریق mrna به همراه اسپرم حاوی dna بررسی گردید. نتایج این مطالعه نشان داد، سیستم phic31 اینتگراز توانائی انتقال هدفمند ژن به داخل جنین های حاصل از smgt را داشت.