ردیابی قارچ verticillium dahliae از خاک و ریشه با استفاده از تکنیک های مبتنی بر pcr

هدف از این پژوهش دستیابی به یک روش دقیق و حساس با کوتاه ترین زمان ممکن برای ردیابی بیمارگر از خاک و اندام های آلوده گیاهی است. در این پژوهش از خاک و ریشه درختان زیتون و زردآلو آلوده به بیمارگر، 16 جدایه v. dahliae جداسازی و خالص سازی شد. با استفاده از آغازگرهای اختصاصی در چرخه nested-pcr شناسایی مورفولوژیکی جدایه ها تایید گردید. برای تعیین مناسب ترین روش ردیابی بیمارگر از خاک و ریشه از سه روش محیط کشت نیمه انتخابی، گیاه تله و روش مولکولی nested-pcr استفاده گردید. روش گیاه تله به دلیل زمان بر بودن و عدم حساسیت و دقت لازم جهت ردیابی بیمارگر مناسب تشخیص داده نشد. استفاده از محیط کشت به روش ظرف وارکوپ در مدت زمان طولانی قادر به ردیابی بیمارگر از خاک بود، اما تکنیک nested-pcr به دلیل حساسیت و دقت بالا جهت ردیابی بیمارگر درکوتاه ترین زمان ممکن به روش بهتر ارزیابی گردید. بررسی میزان مایه تلقیح اولیه و مدت زمان لازم برای ردیابی بیمارگر نشان داد که دمای خاک در ردیابی بیمارگر نقش دارد. در خاک های لومی دارای دو درصد ماده آلی فاقد میزبان با افزایش مایه تلقیح اولیه مدت زمان لازم برای ردیابی بیمارگر کاهش یافت و با نوسانات دمای خاک جهت رشد قارچ در مدت زمان طولانی ردیابی بیمارگر امکان پذیر شد. همچنین در تعیین حساسیت چرخه nested-pcrبرای ردیابیdna بیمارگر مشخص شد که با وجود عوامل بازدارنده در خاک، غلظتdna موجود در خاک آلوده در رقت بیشتر از gm/ gn2/1 قابل ردیابی است. به منظور تایید صحت ردیابی عامل پژمردگی با جدایه v. dahliae از خاک و ریشه، محصول nested-pcr تعیین توالی نوکلئوتیدی گردید. نتایج همردیف سازی دوتایی توالی شناخته شده با توالی v. dahliae موجود در بانک ژن 98 درصد شباهت نشان داد که نشانه صحت ردیابی بیمارگر از خاک به روش nested-pcr بود. با توجه به نتایج بدست آمده، چنین بنظر می رسد که استفاده از روش nested-pcr برای ردیابی v. dahliae از خاک، روش کارآمدی می باشد.