نام پژوهشگر: حسن حیدری فارسانی

اثر هم افزایی پروتئین oprf از pseudomonas aeruginosa و ادجوانت ltb در ایمنی زایی
پایان نامه وزارت علوم، تحقیقات و فناوری - دانشگاه شاهد - دانشکده علوم پایه 1393
  حسن حیدری فارسانی   میرلطیف موسوی گرگری

pseudomonas aeruginosa عامل عفونت های مختلفی مانند عفونت های مجاری ادراری، عفونت های مربوط به زخم و سوختگی، عفونت های قرنیه چشم و مجاری تنفسی تحتانی می باشد. پروتئین oprf در باکتری p. aeruginosa یک پروتئین سطحی بزرگ غشا خارجی می باشد که ازلحاظ خاصیت آنتی ژنی در بین سویه های مختلف حفظ شده است و می تواند به عنوان یک کاندید واکسن امیدبخش باشد. همچنین این موضوع به خوبی اثبات شده است که ltb یک تعدیل کننده ایمنی قدرتمند با فعالیت ادجوانتی قوی می باشد. هدف اصلی مطالعه اخیر ارزیابی ایمنی زایی پروتئین oprf ترکیب شده با ltb به عنوان یک کاندید واکسن علیه p. aeruginosa می باشد. در ابتدا پروتئین oprf بدون ltb و پروتئین کایمر oprf-ltb در وکتور pet28a(+) همسانه سازی شد. سپس پلاسمید های dna نوترکیب به سلول مستعد e. coli bl21(de3) به عنوان میزبان بیانی انتقال یافت. پروتئین ها بیان شده و سپس استخراج شده و با روش sds-page آنالیز شدند. سپس از طریق کروماتوگرافی میل ترکیبی با کمک ستون ni-nta تخلیص شد و پروتئین ها با روش western blotting تائید شدند. سپس موش های balb/cبا استفاده از پروتئین های oprf و پروتئین کایمر oprf-ltb ایمن شدند و آزمایش الایزا انجام شد.ltb توانست ایمنی زایی oprf را افزایش داد. سپس به منظور ارزیابی ایمنی زایی و حفاظت بخشی این پروتئین ها موش های ایمن شده را سوزانده و با p. aeruginosa مورد چالش قراردادیم. موش های ایمن شده با پروتئین کایمر oprf-ltb ایمنی و حفاظت بخشی بیشتری نسبت به موش های ایمن شده با پروتئین oprf بدون ltb از خود نشان دادند بطوری که درصد زنده مانی موش های ایمن با پروتئین های oprf و oprf-ltb به ترتیب 50% و75% نشان داده شد وهیچ یک از موش های غیر ایمن زنده نماندند (p<0.001).همچنین پس از تشریح موش های ایمن با پروتئین های oprf و oprf-ltb و غیر ایمن کاهش در تعداد باکتری ها در کبد وطحال این موش ها نسبت به موش های غیر ایمن مشاهده شد (p<0.001) .علاوه بر این ایمنی زایی غیرفعال (passive) توانست باعث خنثی سازی بیماری زایی این یاکتری شود. بطوریکه این نتایج اثبات می کند که قابلیت oprf-ltb می تواند به عنوان یک کاندید واکسن برای مقابله با عفونتهای p. aeruginosa پیشنهاد شود.